一种新型多肽抑制眼部新生血管的研究

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1、上海交通大学博士学位论文一种新型多肽抑制眼部新生血管的研究姓名：郑颖申请学位级别：博士专业：眼科学指导教师：许迅20120517上海交通大学医学院博士学位论文一种新型多肽抑制眼部新生血管的研究摘要研究目的1．从人胎盘生长因子．1(humanplacentalgrowthfactor．1，P1GF．1)中筛选出可能具有抑制新生血管活性的多肽；2．通过细胞学实验和动物学实验检验筛选出的多肽是否具有抑制新生血管的作用；3．初步探索多肽发挥抑制新生血管作用的可能机制；4．通过功能学和组织形态学方法对筛选出的多肽进行生物安全性检测，为今后治疗新生血管相关性眼病的药物开发奠定基础。研究内容和方法1．根据

2、P1GF．1与其受体：血管内皮细胞生长因子受体-l(vascularendothelialgrowthfactorreceptor-1，VEGFR-1)结合的关键部位从人PIGF．1中筛选可能具有抑制新生血管活性的氨基酸片段，通过固相合成法合成相应的多肽，并用高效液相色谱(high-performanceliquidchromatography，HPLC)和质谱分析(massspectrometry，MS)对所合成多肽进行鉴定。2．利用MTS方法、改I曼Boydend',室系统及Matrigel基质胶系统检测多肽对人脐静脉血管内皮细胞(HumanUmbilicalVeinEndothelia

3、lCells，HUVECs)增殖、迁移和管腔形成的干预作用；3．研究多肽对鸡胚尿囊膜(CAM)模型、小鼠角膜微囊袋模型、氧诱导小鼠视网膜病变(Oxygen-InducedRetinopathy)模型以及裸鼠肿瘤模型中新生血管的抑制作用；4．利用竞争性结合ELISA法、WesternBlotting技术初步探讨多肽抑制新生血管活性的可能机制：5．利用电生理技术、组织病理切片以及透射电镜等方法观察多肽对小鼠视网膜潜在的毒性作用。研究结果从人PIGF．1中筛选出一段可能具有抗新生血管活性的多肽，命名为ZYl，MW：2221．66Da。多肽ZYI对HUVECs细胞作用后能够有效抑制血管内皮生长因子(

4、VEGF)诱导的细胞的增殖、迁移和管腔形成，与VEGF组之间具有显著差异(尸<0．05)，且多肽ZYl对HUVECs无明显细胞毒性作用。多肽ZYl能有效抑制鸡胚尿囊膜血管生成、小鼠角膜新生血管、小鼠视网膜新生血管、以及6上海交通大学医学院博士学位论文裸鼠肿瘤新生血管的生成，与对照组的差异有统计学意义(尸<0．05)。多肽ZYl能与PIGF及VEGF竞争结合受体VEGFR．1，并且抑制VEGFR-1／E眦KT活化(p<0．05)。玻璃体注射多肽ZYl后小鼠视网膜功能及形态学未发现明显改变(胗O．05)。结论1．多肽ZYI能够有效抑制mr呢Cs细胞增殖、迁移和管腔形成：2．多肽ZYl可抑制体内新

5、生血管的生成；3．多肽ZYl可能通过与PIGF／VEGF竞争结合受体，抑制下游信号转导通路，从而起到抗新生血管的作用；4．多肽ZYl无明显生物毒性作用。关键词：多肽，新生血管，抑制剂，安全性7上海交通大学医学院博士学位论文INⅢBITIONoFOCULARNEOVASCULARIZATIONBYANOVELPEPTIDEPurpose：ToevaluatetheeffectofZYl，anovelpeptidefromhumanplacentalgrowthfactor-1(PIGF-1)，againstpathologicalneovascularizationusinginvitroan

6、dinvivoassays，anditsunderlyingmechanismofanti-angiogeniceffect，andalsotostudyitspossibletoxicitytotheretina．Theresultsfromthisstudyareinformativeforthefuturedevelopmentofclinicalmedicationinthetreatmentofneovascularizationrelateddiseases．Methods：1．TheaminoacidssequencefromhumanPIGF-1wasscreenedbase

7、donseveralresiduescriticaltoP1GF-1／VEGFR-1bindingrecognition，andpeptidesweresynthesizedthroughsolid-phasepeptidesynthesis，andthenverifiedbyhigh-performanceliquidchromatographyandmassspectrometry．2．MTSassays