体外注射vd3和lps对丝羽乌骨鸡维生素d受体及β-防御素基因表达的影响

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1、万方数据SichuanAgricultureUniversityMasterDegreeDissertationEffectsofvitaminD3andLPSbyinjectionontheexpressionofvitaminDreceptorandbeta—defensinsgenesinSilkiesByYan—liLongDirectedbyProf．QingZhuAnimalGenetics，BreedingandReproductionMolecularGeneticsandPoultryBreedingCollegeofAni

2、malScienceandTechnology,SichuanAgriculturalUniversityYaan，Sichuan，ChinaJune，2014论文指导小组成员型缎燮缈炒万方数据刘益平(教授)王彦(副研究员)赵小玲(副教授)(四川农业大学动物科技学院)李思明(研究员)(江西省农业科学院畜牧兽医研究所)本论文由国家自然科学基金(课题编号：3ll605O0)和四川省创新团队课题立项(项目编号：11TDO07)资助本试验在四川农业大学“畜禽遗传资源发掘与创新利用"四川省重点实验室完成万方数据论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论

3、文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机俺盼、刊立或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：说{蕾硒知心年易月他日，关于论文使用授权的声明本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位

4、论文。同意四川农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。耐本论文不保密。口本论文保密，在一年解密后适用本授权。(请在以上口内划“√”)研究生签名：导师签名：鳓细物≯，中年6月Iv日沙／毕年6月fp日万方数据四川农业大学2011级硕士研究生毕业论文摘要抗菌肽是先天免疫的重要效应分子，在保护宿主免受致病性微生物危害时起至关重要的作用。家禽中主要存在两大类抗菌肽——B一防御素和cathelicidins，其中最主要的是p一防御素。随着对抗菌肽表达调控研究的深入，发现1，25一(OH)2一D3可以通过激活VDR调控人类抗菌

5、肽的表达。提示VDR可能作为一种转录因子在调控鸡B．防御素表达中发挥重要作用。目前，相关研究还多集中在人类、小鼠、牛等哺乳动物上，家禽体内是否存在这种调节机制，通过对机体补充VD3是否能通过诱导VDR的表达而提高鸡B．防御素的表达水平进而提高家禽的抗病能力都还需进一步验证。本研究以丝羽乌骨鸡为试验模型。利用生物信息学手段预测B一防御素基因是否存在维生素D反应元件典型结构；通过荧光定量PCR检测腹腔注射VD3或LPS后小肠组织中VDR基因和B一防御素基因(GAL．3、一4、一5、一6、一7、一9和一10)mRNA相对表达量的变化，研究VD3对鸡

6、p一防御素表达的调控作用。探讨VDR和p一防御素的表达上调是否能够提高鸡的抗病能力及其在机体抵御病原入侵时的预防作用，为鸡抗病育种提供理论依据。主要研究结果如下：1)通过NCBI、Ensembl数据库获得B．防御素基因启动子区域转录起始位点前2000碱基序列，利用NHR．scan分析这些序列发现，鸡14个B．防御素基因中有7个基因启动子区域存在典型的DR3型和ER6型VDRE序列。这7个B．防御素基因分别是GAL一3、．4、一5、一6、一7、．9和一J7D。2)腹腔注射VD3后，小肠中VDR基因mRNA的相对表达量显著高于注射生理盐水的对照组

7、(氏0．05)；小肠中D一防御素基因GAL一3、一4、一5、一6、一7和一_『D的mRNA相对表达量也高于对照组，GAL一4、GAL一6和GAL一10基因mRNA表达水平显著上调(氏0．05)。结果表明，机体补充VD3对丝羽乌骨鸡体内D一防御素基因的表达可以起到上调作用，其调节防御素基因表达的信号传导途径可能跟VDR的介导相关。3)注射VD3后，VDR基因表达水平与GAL．5基因表达水平极显著相关(P

8、D3后不同时间点小肠中VDR及B．防御素基因mRNA的相对表达量变化分析发现，注射后4h和24h时VDR基因mRNA表达量显著上调(氏0．05)：B．防御素基因GA