三种重要海水养殖鱼类的分子遗传学与研究

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1、中国海洋大学博士论文三种重要海水养殖鱼类的分子遗传学研究摘要近年来，虽然海水鱼类养殖业发展迅速，但育种工作的滞后却成为制约养殖业进『-步发展的瓶颈。牙鲆、大菱鲆、真鲷是当前我国重要的海水养殖鱼类。然而，对这些鱼类育种工作中遇到的一些基础问韪如群体遗传结构分析、选择性养殖群体同普通群体的遗传差异比较、超低温保存后鱼苗的遗传多样性评估、微卫星标记筛选等研究较少，本文针对这些重要海水养殖鱼类在育种工作中遇到的上述问题利用AFLP、SSR、ISSR、RAPD分子标记技术进行了探讨。利用AFLP、SSR、I

2、SSR、RAPD标记比较了牙鲆普通群体和选择性养殖群体的遗传结构差异；利用AFLP标记筛选到了部分牙鲆抗病候选标记：利用SSR标记分析了超低温保存精子孵化的大菱鲆的遗传多样性；从真鲷eDNA文库中开发了一批微卫星标记；以期加快这些熏要海水养殖鱼类在遗传变异分析、分子标记辅助育种、重要经济价值基因定位及遗传图谱构建等方面的研究工作。本文的主要工作及结论如下：1．利用10对AFLP引物组合对三个牙鲆群体60个个体进行了遗传结构分析。普通群体、感病群体和抗病群体扩增的条带总数分别为491、462、485

3、，两个选择性养殖群体的总带数都低于普通群体。普通群体的多态性位点总数为323，而感病群体和抗病群体分别为284和279，普通群体的多态性位点总数显著(P<0．05)高于选择性养殖群体。三个群体的多态位点百分比(PPB)分别为65．78％(普通群体)，61．47％(感病群体)，60．927％(抗病群体)。另外，发现三个群体的一些AFLP位点存在频率差异。在低频区间(0～O．2)，普通群体的位点数显著(P

4、普通群体。这说明选择性养殖群体同普通群体之间已经产生了一定的遗传距离。2．利用61对AFLP引物组合扫描了牙鲆感病群体和抗病群体各20个个体，虽然没有发现在一个群体中全显性而在另一个群体中全隐性的标记。但有一些三种重要海水养殖鱼类的分子遗传学研究AFLP条带在两个群体中显示了极大的差异，这些标记很可能就是与抗病相关的候选标记。其中有2条带是在抗病群体中出现的高显性基因频率的标记，另外6个是在感病群体中出现的高显性基因频率的标记。将这些片段回收、克隆、测序后即获得这些与抗病相关候选标记的序列。3．应

5、用lO对微卫星引物对三个牙鲆群体共90个个体进行了群体遗传多样性分析。共得到76个等位基因，等位基因的大小在120～350bp之间。普通群体的平均等位基因数为7．6，显著(P

6、和0．425，普通群体低频等位基因(0～O．05)总数为27个，而感病群体和抗病群体分别只有15个和19个。普通群体共得到14个私有等位基因，感病群体和抗病群体仅各得到3个等位基因。研究结果表明了感病群体和抗病群体两个选择性养殖群体遗传多样性的降低。4．利用12条ISSR引物对三个牙鲆群体进行了遗传结构分析。12条ISSR引物在45个牙鲆个体中共产生了106条ISSR带，分子量在250～1500bp之间，其中38条是多态性的，平均每条引物产生8．83条带。普通群体共产生了106条ISSR带，而感瘸

7、群体和抗瘸群体分别产生了98和97条带。普通群体的多态性位点总数为36个，其PPB值为33．96％；而感病群体和抗病群体的多态性位点总数分别为27和26个，它们的PPB值分别为27．55％和26，80％。普通群体的多态位点显著(P<0．05)高于感病群体和抗病群体。香农指数在普通群体和选择性养殖群体之间也显示出了较大的差异，普通群体的值为O．1432，而感病群体和抗病群体分别为0．1185和0．1160。由普通群体得到的总基因型数为40，感病群体和抗病群体各获得3l和33个基因型，显示出了显著的差

8、异(P