（果树学专业论文）利用rapd标记技术进行葡萄品种遗传多样性研究

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1、摘要葡萄是栽培最广泛的果树之一。在长期的进化和栽培历史中形成了许多种群和品种群，由于葡萄种内变异很大，加上种间的自然杂交以及世界范围内对葡萄的广泛繁殖，使得葡萄的分类鉴定十分困难。本研究以47个葡萄栽培品种为试验材料，应用RAPD分子标记技术，迸行葡萄品种的亲缘关系研究，目的在于建立葡萄品种的RAPD反应体系；探讨葡萄品种间的亲缘关系；为杂交育种提供分子学依据。主要结果如下：l、在传统CTAB法的基础上，将分类的加入酚的结合剂(PVP20％)和抗氧化剂(B一巯基乙醇)两类方法组合起来有效去除多酚类杂质；并采用高浓度的

2、盐抑制多糖和DNA一起沉淀从而分离多糖和DNA的方法，制备的DNA无凝胶状物质、蛋白质和酚类物质，适于PCR扩增。2、确定了适合葡萄RAPD反应的反应体系为：模板DNA为lul(稀释15倍)，MgCl22．0mmol／L，dNTP0．8mmol／L，TaqDNA聚合酶1U，Primer8pmol，总体积为25ul，剩下的用ddH20来於充：确定了适合葡萄RAPD反应扩增程序为：94℃预变性4分钟，94℃变性45s，37℃退火55s，72。C延伸80s，40个循环，72℃延伸10分钟。3、从100个引物中筛选出能稳定扩

3、增的30个引物，用这些引物对47个葡萄品种进行扩增，均具有多态性，共扩增出216条带，121条具有多态性，多态性比例为56．叭％。4、对葡萄属47个品种及类型进行了RAPD扩增，根据相似系数进行了聚类分析能将47个品种聚为5类：第1类包括巨峰、红瑞宝、龙宝等巨峰系品种：第2类包括玫瑰香、红旗特早、达米娜等；第3类包括美人指、瑞必尔、黑大粒、红地球等；第4类包括康可、尼加拉、白香蕉等种间杂交和来源不详品种；第5类包括森田尼无核、克瑞森无核等无核品种。5、建立了京秀、红旗特早及凤凰5l等品种的DNA指纹图谱，找到了它们的

4、特异谱带，利用不同的引物组合，根据DNA指纹和特异谱带，可将47个参试品种鉴别出来。6、RAPD技术在葡萄品种鉴定和纯度分析上应用的可行性分析RAPD是利用一系列引物对整个基因组DNA进行多态性检测，检测区域几乎可以覆盖整个基因组，可以检测出不同品种问的微小差异。本研究结果表明：葡萄品种间的遗传多态性有明显差异，即使父母本相同的品种，也能分开。如“京Il玉”和“奥古斯特”同为意大利和葡萄园皇后的杂交后代；“红瑞宝”和“龙宝”同为金玫瑰和黑潮的杂交后代，利用RAPD技术很容易分开。关键词：葡萄品种；遗传多样性；RAPD

5、遗传距离；遗传相似系数：聚类分析lIISummaryManyspeciespopulationandvarietygroupsofgrape(vitis)havebeenformedinthelonghistoryofgrapeevolutionandculturing．Becauseofgreatvariationwithinthespecis，easilynaturecrossbetweenspeciesandwidegenerationinalltheworld，taxonomyandidentificatio

6、nofgropesareverydifficult，Thestudywasundertakentoidentifygrape(vitis)materialofwideusedvarietiesbyrandomamplifiedpolymorphicDNA(RAPD)．TheaimistoestablishnewanalysissystemofRAPDforgrapecultivar,andtodrawDNAfingerprintingforidentificationofspeciesandvarieties，and

7、toselectmolecularmarkerswithspecialsegmentingrapecultivars．themainresultsasbelow：1．OnthebasisofconventionalmethordCTAB，theantioxidant(pvp20％)andcombinationphysic(B一～lereaptoethan01)wereusedtOwipeoffhydroxybenzeneingrapeleavesandthehi曲densityofsaltwereusedtosepa

8、rateamylose，thiswayisrapidandhighefficienttoextractDNAandtheDNAextractedcanbeusedinRAPDamplificationfromgrapeleaves．SpringleavesarethebestmaterialstoextractDNA．2．Thedifferen