(果树学专业论文)利用rapd标记技术进行葡萄品种遗传多样性研究

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时间:2019-03-03

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1、摘要葡萄是栽培最广泛的果树之一。在长期的进化和栽培历史中形成了许多种群和品种群,由于葡萄种内变异很大,加上种间的自然杂交以及世界范围内对葡萄的广泛繁殖,使得葡萄的分类鉴定十分困难。本研究以47个葡萄栽培品种为试验材料,应用RAPD分子标记技术,迸行葡萄品种的亲缘关系研究,目的在于建立葡萄品种的RAPD反应体系;探讨葡萄品种间的亲缘关系;为杂交育种提供分子学依据。主要结果如下:l、在传统CTAB法的基础上,将分类的加入酚的结合剂(PVP20%)和抗氧化剂(B一巯基乙醇)两类方法组合起来有效去除多酚类杂质;并采用高浓度的

2、盐抑制多糖和DNA一起沉淀从而分离多糖和DNA的方法,制备的DNA无凝胶状物质、蛋白质和酚类物质,适于PCR扩增。2、确定了适合葡萄RAPD反应的反应体系为:模板DNA为lul(稀释15倍),MgCl22.0mmol/L,dNTP0.8mmol/L,TaqDNA聚合酶1U,Primer8pmol,总体积为25ul,剩下的用ddH20来於充:确定了适合葡萄RAPD反应扩增程序为:94℃预变性4分钟,94℃变性45s,37℃退火55s,72。C延伸80s,40个循环,72℃延伸10分钟。3、从100个引物中筛选出能稳定扩

3、增的30个引物,用这些引物对47个葡萄品种进行扩增,均具有多态性,共扩增出216条带,121条具有多态性,多态性比例为56.叭%。4、对葡萄属47个品种及类型进行了RAPD扩增,根据相似系数进行了聚类分析能将47个品种聚为5类:第1类包括巨峰、红瑞宝、龙宝等巨峰系品种:第2类包括玫瑰香、红旗特早、达米娜等;第3类包括美人指、瑞必尔、黑大粒、红地球等;第4类包括康可、尼加拉、白香蕉等种间杂交和来源不详品种;第5类包括森田尼无核、克瑞森无核等无核品种。5、建立了京秀、红旗特早及凤凰5l等品种的DNA指纹图谱,找到了它们的

4、特异谱带,利用不同的引物组合,根据DNA指纹和特异谱带,可将47个参试品种鉴别出来。6、RAPD技术在葡萄品种鉴定和纯度分析上应用的可行性分析RAPD是利用一系列引物对整个基因组DNA进行多态性检测,检测区域几乎可以覆盖整个基因组,可以检测出不同品种问的微小差异。本研究结果表明:葡萄品种间的遗传多态性有明显差异,即使父母本相同的品种,也能分开。如“京Il玉”和“奥古斯特”同为意大利和葡萄园皇后的杂交后代;“红瑞宝”和“龙宝”同为金玫瑰和黑潮的杂交后代,利用RAPD技术很容易分开。关键词:葡萄品种;遗传多样性;RAPD

5、遗传距离;遗传相似系数:聚类分析lIISummaryManyspeciespopulationandvarietygroupsofgrape(vitis)havebeenformedinthelonghistoryofgrapeevolutionandculturing.Becauseofgreatvariationwithinthespecis,easilynaturecrossbetweenspeciesandwidegenerationinalltheworld,taxonomyandidentificatio

6、nofgropesareverydifficult,Thestudywasundertakentoidentifygrape(vitis)materialofwideusedvarietiesbyrandomamplifiedpolymorphicDNA(RAPD).TheaimistoestablishnewanalysissystemofRAPDforgrapecultivar,andtodrawDNAfingerprintingforidentificationofspeciesandvarieties,and

7、toselectmolecularmarkerswithspecialsegmentingrapecultivars.themainresultsasbelow:1.OnthebasisofconventionalmethordCTAB,theantioxidant(pvp20%)andcombinationphysic(B一~lereaptoethan01)wereusedtOwipeoffhydroxybenzeneingrapeleavesandthehi曲densityofsaltwereusedtosepa

8、rateamylose,thiswayisrapidandhighefficienttoextractDNAandtheDNAextractedcanbeusedinRAPDamplificationfromgrapeleaves.SpringleavesarethebestmaterialstoextractDNA.2.Thedifferen

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