cx43、akap95、cycline2蛋白在肺癌组织及细胞中相互关系的研究

《cx43、akap95、cycline2蛋白在肺癌组织及细胞中相互关系的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、厦门大学硕士学位论文Cx43、AKAP95、cyclinE2蛋白在肺癌组织及细胞中相互关系的研究姓名：马丹申请学位级别：硕士专业：肿瘤学指导教师：张永兴2012摘要细胞间隙连接蛋白(connexin，Cx)是定位于细胞膜上的一种跨膜通道蛋白，是构成间隙连接(Gapjunction，GJ)的基本结构和功能单位的主要成分。相邻细胞问通过GJ介导的细胞间隙连接通讯(Gap．junctionintercellularcommullication，GJIC)能够进行信息、能量和物质的交换，从而对细胞增殖、分化及机体的生长发育起着至关重要的作用。近年来发现，细胞问隙连接

2、蛋白在肿瘤的发生、发展过程中具有重要的作用。研究表明，Cx蛋白除在细胞膜上形成细胞间隙连接的功能外，尚可直接在细胞内参与细胞周期调节而发挥其对细胞生长和增殖的调控作用。其中Cx43由于分布广泛、数量丰富而被广泛研究，是一种肿瘤抑制基因，可抑制多种肿瘤生长，并具有影响细胞周期蛋白cyclins表达的作用。AKAP95蛋白是PKA的锚定蛋白，有研究提出在中国仓鼠卵巢CHO细胞中，』u认P95蛋白与D类cyclins蛋白的存在相互作用关系，其后续研究指出cyclillE蛋白与AKAP95蛋白在细胞中发生共沉淀，并且CD融与AKAP95竞争性结合Gl／S期的细胞周期

3、性蛋白cyclins，Gl／S期的cyclins蛋白通过AKAP95与PKA的RII亚基相互作用。为了研究CX43、AKAP95和cyclillE2三种蛋自在肺癌组织中的表达情况，我们利用免疫组织化学的实验方法(S—P法)检测三种蛋白在5l例肺癌组织与15例癌旁组织中的表达，并分析其与肺癌临床病理参数的联系及相互关系。结果显示，cX43蛋白在肺癌组织的表达水平明显低于癌旁组织(≯=4．970，po．026

4、明显高于癌旁组织(仁=19．636，P

5、在肺组织中的表达情况可能参与肺癌的发生发展及组织分化过程；其中，Cx43蛋白可能参与肺癌的淋巴结转移过程，cyclinE2蛋白可能与肺癌的组织学分型相关；Cx43蛋白与cyclinE2蛋白还可能存在相互作用共同影响肺癌的发生发展过程。为了在细胞水平上，探讨人肺癌细胞A549中是否存在AKAP95蛋白与细胞周期蛋白cyclinE2的相互结合作用，并通过转染Cx43基因，深入探索Cx43蛋白非依赖细胞问隙连接通讯功能对细胞周期生长调控的作用机制，我们利用细胞浆核蛋白分离，免疫共沉淀结合Westemblot的实验技术，证明A549细胞核内存在AKAP95蛋白与cy

6、clinE2蛋白的相互结合关系，细胞浆内未发现二者相互结合；A549细胞转染Cx43基因后，不影响细胞核内AKAP95蛋白与cyclinE2蛋白的相互结合关系，并发现A549．Cx43细胞浆内出现AKAP95蛋白的表达，且细胞浆内表达的A鼬心95蛋白与CyclinE2蛋白也存在相互结合关系。Cx43的过表达对A549细胞中触∽P95蛋白与cycliIlE2蛋白表达情况的影响，为深入研究Cx43蛋白调控细胞生长和增殖的作用机制提供有用的实验数据。另外，免疫组织化学法、W色stemblot和细胞免疫荧光均在肺癌细胞浆中发现cyclinE2蛋白的表达。为了研究人肺

7、癌细胞A549中，PKA活性是否影响细胞核内CX43蛋白和削队P95蛋白的相互结合，我们利用细胞免疫荧光实验，采用共聚焦显微镜观察经PKA抑制剂H．89处理前后的A549细胞内Cx43蛋白与AKAP95蛋白的共定位关系，结果显示，PKA活性对Cx43蛋白与AKAP95蛋白在A549细胞核内的共定位无影响，二者存在相互结合关系，但值得指出来的是，加入H．89使PKA活性受到抑制后，Cx43蛋白主要定位在细胞核内。关键词：CX43；A比廿95；cyclillE2ⅡAbstractCoIlllexins(Cx)areafamilyofsmlcturally—rel

8、atedtransmembraneproteinst