鸡白介素18成熟蛋白的发酵工艺及其对新城疫疫苗免疫增强作用研究

《鸡白介素18成熟蛋白的发酵工艺及其对新城疫疫苗免疫增强作用研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、山东农业大学硕士学位论文鸡白介素18成熟蛋白的发酵工艺及其对新城疫疫苗免疫增强作用研究姓名：张海滨申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：赵宏坤20120615山东农业大学硕士学位论文中文摘要鸡白介素18(Chickeninterleukin．18，ChlL一18)是2000年发现的一种细胞因子，它具有广泛的生物学活性，除能够促进丫．干扰素(IFN-V)的产生，刺激淋巴细胞转化，增强NK细胞的杀伤活性，还在介导细胞免疫、抵抗微生物感染方面具有重要的作用。毕赤酵母表达系统是目前最为成功的外源蛋白表达系统之一，该系统操控简单、经济，表达量高，具有翻译后

2、修饰的能力。目前已有多种外源蛋白在毕赤酵母表达系统中得到成功表达。因此可用毕赤酵母表达获得高产量且具有生物活性的鸡白介素18成熟蛋白(matureChickeninterleukin．18，mChlL．18)。本试验我们对表达重组鸡白介素18(mChlL．18)的毕赤酵母工程菌株GSl15／pPIC9K．mChlL．18进行中试发酵表达，优化各种发酵条件以提高表达产量。然后将mChlL．18制备成脂质体制剂以提高其生物利用度，测定其对新城疫疫苗的免疫增强作用，为mChlL．18的研究与开发打下基础。本研究的主要结果如下：复苏工程菌GSI15／pPIC9

3、K．mChIL．18于YPD培养基，在其OD600达到5．2左右时转入发酵罐中，采用分批补料方式对毕赤酵母工程菌进行高密度发酵。控制和优化各种发酵条件，经历84h结束发酵。将发酵液离心，用6xHis镍柱对上清中的表达产物进行纯化。经优化表达条件，证明在pH5．5，溶氧值20％．30％，温度28"(2，诱导72h，mChIL．18的表达产量为560mg／L，发酵上清经纯化后纯度可达70％以上。用逆向蒸发法制备半胱胺脂质体将mChIL．18与胆固醇和磷酸卵磷脂按照一定的比例减压蒸馏制成，包封率为25．4％。同时，针对IL．18具有免疫治疗及免疫增强作用这一

4、功能，将SPF鸡随机分成4组，I组为单纯疫苗组：II组为联合免疫组，每组注射0．2mLmChlL-18脂质体；III组为空载体免疫组；IV组为空白对照组，只注射生理盐水。7日龄首免，从体液免疫和细胞免疫水平上分析试验结果。结果表明，mChlL．18脂质体与疫苗联合接种试验鸡所产生的HI抗体在接种14d后一直高于单纯疫苗免疫组，且在接种后第14、21和28天时差异显著(尸

5、8+T细胞都呈上升趋势，但一免的7d后呈下降趋势，在二免后又呈上升趋势且持续时间比较长，在各阶段与其它组差异显著(P

6、苗；免疫增强2山东农业大学硕二}：学位论文Large·-scalefermentationofmaturechickeninterleukin··18proteinandStudyonItsImmunoenhancementonNewcastleDiseaseVaccineAbstractChickeninterleukin一18(ChIL-18)wasfoundedin2000，whichhasmultiplebiologicalactivitiesincludinginductionofIFN吖fromNKcellsandantigen-ormit

7、ogen-stimulatedThlcells，upregulationofIL一2RonTcells，enhancementofFasligand-mediatedcytotoxieityofT-helpercellsandaugmentationofNKcellcytotoxicity．ThePichiapastorisisoneofthemostsuccessfulfreignproteinexpressionsystemsuntilnow．Itofferseconomy,easeofmanipulation，theailitytoperform

8、complexpost—translationalmodifications，andhighe