tet-on调控hsv1-tk基因治疗系统致mcf-7细胞dna损伤及调亡机制研究

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1、万方数据中图分类号QZ§!UDC570硕士学位论文学校代码10533密级垒珏Tet-On调控HSVl．tk基因治疗系统致MCF．7细胞DNA损伤及凋亡机制研究TheStudyonthemechanismofapoptoticandDNAdamagecausedbyTet-OnregulatedHSV1一tkgenetherapysysteminMCF．7cells一一一作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：论文答辩日期zolar．5，多D任自敬生物学生物化学与分子生物学生命科学学院曾赵军副教授答辩委员会主席衄中南大学2014年5月万方数据学位

2、论文原创性声明本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：啦数日期：卫!生年五月鱼日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本

3、人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。导师签名!塑尘吲』旷l／导师签名：坚：《日期：趔L年上月卫日日期：型旦年上月兰Et万方数据硕士学位论文中文摘要Tet-On调控HSVl．腑基因治疗系统致MCF．7细胞DNA损伤及凋亡机制研究1㈣m㈣㈣叭m帆妇霄Y2684260洞当尝一乳腺癌是严重危害女性健康的一种疾病，已经逐渐成为当今社会一个严峻的卫生问题。目前迫切需要开发新的有效的和毒性低的治疗系统来降低乳腺癌死亡率。肿瘤的自杀基因治疗具有良

4、好应用前景。其中单纯疱疹病毒I型胸苷激酶基因联合GCV的治疗系统应用最为广泛。在前期研究中，成功利用Tet．On调控系统对单纯疱疹病毒I型胸苷激酶基因成实施了精确调控。通过彗星实验检测到该治疗系统处理乳腺癌细胞株MCF．748h后有明显的彗星拖尾现象。我们推测该系统对MCF．7细胞的杀伤作用可能参与DNA损伤修复或阻止DNA合成等过程。为了进一步揭示Tet．On调控HSVl．tk治疗乳腺癌的分子机制，我们拟运用RT-PCR及Westernblotting技术检测DNA损伤修复相关分子在mRNA、蛋白水平的表达变化；免疫荧光技术检测BRCAl、7-H2AX在细胞

5、中的定位；用MTT及集落形成实验检测细胞体外增殖；流式细胞术检测细胞早期凋亡；DAPI染色进行细胞核形态观察。结果显示：该系统干预MCF．7后，H2AX在mRNA水平表达上调；Y．H2AX在蛋白水平表达上调；免疫荧光组织化学显示Y．H2AX定位于细胞核、BRCAl主要位于细胞质；MTT和集落形成实验显示MCF．7细胞的体外增殖能力受到影响；与DNA损伤修复相关的多种分子ATM、P53、BRCAl、PARPl、PNK、R2、TKl、CHK2、RB、P21等表达量上调；Westernblotting检测到PARPl蛋白的剪切现象，预示凋亡的产生。进一步检测凋亡现象

6、：流式细胞术检测到处理组出现早期凋亡细胞；DAPI染核后观察到典型的细胞核凋亡形态；检测到凋亡通路末端分子caspase-3在蛋白水平及mRNA水平都有上调；这些结果证实Tet．On调控下的HSVl一tk作用MCF．7后造成了DNA双链断裂损伤；DNA损伤介导的细胞凋亡是rAAWTRE／Tet．On／HSVl．腩系统杀伤乳腺癌细胞的机制之一。关键词：乳腺癌；HSVl．疵；GCV；Tet．On；DNA损伤修复；自杀基因治疗II万方数据硕士学位论文英文摘要TheStudyonthemechanismofapoptoticandDNAdamagecausedbyTe

7、t·-OnregulatedHSVl--tkgenetherapysysteminMCF．7cells⋯AbstractBreastcancerisseriousllyharmfultothehealthofwomen，whichhasgraduallybecomeaseverehealthproblemofsociety．Thereisallurgentneedtodevelopneweffectiveandlesstoxictreatmentsystemstoreducebreastcancermortality．Cancersuicidegenether

8、apyhasgoodprospects