大鼠铜绿假单胞菌脓毒症脏器tlr4md--2基因表达和血清细胞因子il--10、il--12变化

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1、温州医学院硕士学位论文大鼠铜绿假单胞菌脓毒症脏器TLR4/MD--2基因表达和血清细胞因子IL--10、IL--12变化姓名：温从丛申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：葛仁山；胡国新2012-05-23温州医学院硕士学位论文大鼠铜绿假单胞菌脓毒症肝脏TLR4／MD-2基因表达和血清细胞因子IL-10、lL-12变化摘要目的：通过建立大鼠铜绿假单胞菌脓毒症模型，来观察研究该模型大鼠脏器中TLR4、MD．2，和血清中IL．10、IL．12等量的变化及脓毒症时肝脏组织及功能的改变，为进一步探索铜绿假单胞菌脓毒症发病过程中机体的改

2、变奠定基础。方法：1．清洁级Sprague—Dawley(SD)雄性大鼠50只，随机分成5组，每组10只，1组为正常对照组A，麻醉后活杀；2～5组为不同时间段铜绿假单胞菌性脓毒症组B，经腹腔注射(Ip)铜绿假单胞菌悬液，细菌浓度为9x108ofu／ml，注射剂量为1．0ml／1009大鼠体重，建立大鼠铜绿假单胞菌脓毒症模型。B组大鼠分别在注射铜绿假单胞菌后2h、6h、10h、16h时活杀，每时相点动物数分别为10只。取部分肝脏，置于4％多聚甲醛液中固定。无菌采下腔静脉血，无菌取部分肝组织于液氮中保存待用。2．观察B组大鼠在染菌

3、后的呼吸、进食、活动、精神状态等情况的改变，并检测大鼠体温的变化。每时相点随机取B组大鼠1只，无菌采血后予常规血培养铜绿假单胞菌。3．取2ml抗凝血送检血常规，取2ml经3000rpm／min离心5min的血清送检肝功能、肾功能。4．使用酶联免疫法(ELISA)测定各组大鼠血清中白细胞介素．10(IL．10)、白细胞介素．12(IL．12)的含量。5．使用RT．PCR法检测大鼠Toll受体4(TLR4)和髓样分化蛋白2(MD．2)mRNA的表达。6．HE染色光镜观察肝脏组织病理学上的改变。7．计量资料采用均数士标准差(x土s)

4、表示，采用SPSSl2．0软件进行t检验和相关系数统计分析，P<0．05为差异统计学意义。结果：1．A组大鼠活动自如，呼吸平稳。B组大鼠染菌4h后，开始出现竖毛，懒散、活动减少，呼吸急促，食欲减退；6h后出现精神萎靡，反应明显变慢，呼吸急温州医学院硕士学位论文促现象；此后症状加重，甚至出现毛色直立变暗、尾巴发紫，部分老鼠腹部凹陷明显，还有鼻子出血症状。检测体温可见，与A组比较B组除6h组外，其余组大鼠均表现体温降低(P<0．05)。血培养结果部分呈阳性，血平板可见细菌生长，并进行生化鉴定，明确为铜绿假单胞菌。2．A组大鼠白细胞

5、数是(6．6054-0．7683)×109／L；B组铜绿假单胞菌感染2h．(3．9184-0．6923)、6h(2．0314-O．3212)、lOh(3．1354-0．9552)和16h(3．5144-0．2899)，与A组比较，除2h组外，其余各组白细胞数明显下降(P

6、比较，各组大鼠ALT水平明显升高(P<0．05)，并于lOh达到峰值。A组大鼠肝功能谷草转氨酶(AST)含量是(95．294-10．46)U／L；B组铜绿假单胞菌感染2h(118．04-2．430)、6h(150．14-5．453)、lOh(190．74-42．09)和16h(221．14-33．67)，与A组比较，除2h组外，其余各组大鼠AST水平明显升高(P

7、9)、6h(9．871士0．8890)、lOh(17．73士1．411)和16h(21．734-4．209)，与A组比较，各组大鼠BUN水平明显升高(P<0．05)，并于16h达到峰值。A组大鼠血清肌酐(CR)含量是(21．29士0．8650)ummol／L；B组铜绿假单胞菌感染2h(18．864-0．4592)、6h(24．864-1．280)、lOh(32．714-2．485)和16h(37．86士8．259)，与A组比较，各组大鼠BUN水平明显升高(P

8、4．714-O．6061)pg／ml：与A组比较，B组铜绿假单胞菌感染2h(109．74-12．75)、6h(123．4士9．609)、lOh(147．54-35．52)和16h(273．3士34．78)，各组IL．10含量均高于A组(P