平邑甜茶凋亡基因bag,dad和hsp70的克隆及其对镉和渗透胁迫的响应

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1、山东农业大学硕士学位论文平邑甜茶凋亡基因BAG，DAD和HSP70的克隆及其对镉和渗透胁迫的响应姓名：沈伟申请学位级别：硕士专业：果树学指导教师：杨洪强20120608山东农业大学硕士学位论文中文摘要平邑甜茶(Malushupehensis(Pamp)Rehd．varpinyiensisJiang)是我国特有的植物资源，常用作苹果和观赏海棠的砧木。本研究以平邑甜茶为试材，克隆了MhBAG，MhDAD和MhHSP70基因的全长eDNA序列，并运用生物信息学手段分析了其基因序列与编码蛋白的性质和功能；同

2、时，研究了它们在重金属、盐及干旱胁迫下的表达情况，并对细胞凋亡率进行了测定。成功构建了MhBAG，MhDAD基因正反义表达载体并转化拟南芥，获得转基因拟南芥植株。主要结果如下：1)获得了平邑甜茶MhBAG基因，该基因eDNA全长1841bp，含有1017的完整开放阅读框，编码338个氨基酸，GenBank登录号为HQ639935。2)获得了平邑甜茶MhDAD基因，该基因eDNA全长546bp，含有360的完整开放阅读框，编码119个氨基酸，GenBank登录号为JN390964。3)获得了平邑甜茶M

3、hHSP70基因，该基因eDNA全长2307bp，含有1953的完整开放阅读框，编码650个氨基酸，GenBank登录号为HQ876864。4)半定量RT-PCR结果表明，在硫酸镉胁迫、盐胁迫以及干旱胁迫下，随胁迫程度的加剧，MhBAG、MhDAD的表达量逐渐下降，MhHSP70的表达量则呈现上升趋势，测定细胞凋亡率亦逐渐增加。5)构建了pET-30a．MhBAG原核表达载体，进行了原核表达实验，测定MhBAG蛋白大小为37kD。6)构建了pBll21．MhBAG正反义表达载体，并通过花序侵染法转化

4、拟南芥，通过抗性筛选和PCR检测，得到转基因再生阳性植株。7)构建了pBll21．MhDAD正反义表达载体，并通过花序侵染法转化拟南芥，获得To代种子。关键词：平邑甜茶：PCD；MhBAG基因；MhDAD基因：MhHSPTO基因；拟南芥转化：RT-PCR平邑甜茶抗凋亡基因BAG，DAD和HSP70的克隆及其对镉和渗透胁迫的响应CloningofAnti-ApoptosisGenes-BAG，DADandHSP70fromMalushupehensis(Pamp)Rehd．andTheirRespon

5、setotheStressofCadmiumand0smosisAbstractMalushupehensis(Pamp)Rehd．varpinyiensisJiang(ChinesenameisPingYiTianCha,PYTC)wastheuniqueresourceinOurcountry，whichWasusedwidelyasacommonrootstockot’appleandornamentalcrabapple．Inthisthesis，thefull-lengtheDNAofMh

6、BAG，MhDAD．MhHSP70genewereisolatedbasedonthematerialsofPYTC，thecharacterandfunctionofthegenesequenceandtheproteinthatitencodedWasanalyzedbybioinformatics．Atthesametime，theirexpressionpaRemsandthechangemndencyofapoptosisrateundercadmiumandosmosissressesW

7、asstudied．Otherwise，traasgerficArabidopsisthalianatransformedwithpBI121vectorofMhBAG，MhDADgenewasobtainedbyfloraldiptrans．formation．1)ThefulllongtheDNAofMhBAGWasobtained．Accordingtothehomologoussequencesfromotherplants，degenerateprimersweredesignedtoam

8、plifyspecificDNAfragmentusingcDNApreparedfromPYTCroots．MhBAGwas1841bpinlength,containinganopenreadingframeof1017bpandencoding338aminoacids，andtheaccessionnumberofGeneBankWasHQ639935．2)ThefulllongtheDNAofMhDADWasobtained．Accordingtotheho