平邑甜茶ipt3基因的克隆及其对氮信号响应特性

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1、英文缩写符号及其中英文对照表英文缩写AmpCal订V35SbpcDNAC呦ddH20DEPCDNAdNTPDTTE．coliEBEDTAGUSIPTGKanLBMOPSmRNAMSNa3P04NaOAC·PAGE英文名称Ampicillin35SpromoterofcauliflowerMosoievirusBasePairComplementaryDNACetyltrimethylammol／loniurnBromideDistilledantdeionizedwaterDiethylpyroca

2、rbonateDeoxyribonucleicacidDeocyribonucleosidetriphosphateDiethiothreitolEscherichiacoliEtllidiumbromideEthylenediaminetetraaceticacidfl-glucuronidase’Isopropylthio·B-D—galactosidKanamycinLuria-bcrtanimedium3-(N-morphplino)propanesulfonieMessageRNAMura

3、shigeandSkoogmediaSodiumphosphateSodiumacetatePolyacrylamidegelelectrophoresis中文名称氨苄青霉素花椰菜花椰病毒35S启动子碱基对互补DNA十六烷基三乙基溴化铵重蒸水焦碳酸二乙酯脱氧核糖核酸脱氧核糖核苷三磷酸二硫苏糖醇大肠杆菌溴化乙锭乙二胺四乙酸p．葡糖醛酸酶异丙基．p．D．硫代半乳糖卡那霉素LB培养基3．N吗啉代丙磺酸信使RNAMS培养基磷酸钠醋酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳PBSPhosphatebuffer磷酸缓冲液PVPPo

4、lyvinylpyrrolidone聚乙烯吡咯烷酮RifRifampicin利福平RNARibonucleicacid核糖核酸RNaseARibonucleaseA核糖核酸酶A关于学位论文原创性和使用授权的声明本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研究所取得的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要贡献的个人或集体，均在文中明确说明。本声明的法律责任由本人承担。本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规定，同意学校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸质本和电子版，允许

5、论文被查阅和借阅。本人授权山东农业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手土‘、’段保存论文和汇编本学位论文。保密论文在解密后应遵守此规定。论文作者签名：趱导师签名：彭皿蚴日期：篮：笸：!o山东农业大学硕士学位论文中文摘要在已研究不同形态氮养分对果树叶片生长影响的基础上，为探讨果树叶片生长对根际硝态氮产生较快反应的机理，以水培平邑甜茶幼苗为试材，克隆根系细胞分裂素合成酶(异戊烯基转移酶)编码基因(拗伊乃)，同时采用实时荧光定量PCR研究MhlPT3表

6、达量的变化，采用酶联免疫测定植株中Z+ZR与iP+iPA、IAA、ABA含量的改变，并测定分析了不同供氮形态对植株生长的影响，主要结果如下：1．根据已知苹果异戊烯基转移酶基因的EST序列，设计特异引物利用RT-PCR结合RACE技术获得了异戊烯基转移酶基因，命名为MhlPT3。GenBank注册号为DQ792508。序列分析表明，MhlPT3eDNA全长l314bp，含有963bp的完整开放阅读框，编码分子量为37．3KD的321个氨基酸；结构分析发现，MhlPT3蛋白上含有ATP／ADP结合位点；

7、同源性分析发现，MhlPT3蛋白与AtlPTl，AtlPT3，AtlPT4，AtlPT5，AtIPT6，AtlPT7和AtlPT8蛋白同源性分别为34．22％，53．27％，35．34％，55。29％，35．1l％，47．43％和38．14％，而与AtlPT2和AflPT9氨基酸同源性仅为25．1％和25．52％；聚类分析表明，舳T3蛋白与巧IPT3(Lotusjaponicus)、AtlPT3(Arabidopsisthaliana)和BrlPT3(BrassicarapaL．)蛋白的同源性最高。

8、以平邑甜茶的DNA为模板进行／vlMPT3编码区的克隆，结果发现所克隆的序列与以eDNA为模板所克隆的编码区序列完全相同，说明脚刀编码区内没有内含子。构建了pBll21．IVIhlPT3正反义表达载体，并对烟草和‘皇家嘎拉’苹果进行农杆菌侵染的遗传转化。将MhlPT3编码区正向克隆到原核表达载体pET30a-c(+)，并通过原核表达获得了MhlPT3蛋白，为迸一步研究异戊烯基转移酶的功能提供了条件。2．荧光定量PCR分析MhlPT3的表达发现，MhlPT3基因在平邑甜