欢迎来到天天文库
浏览记录
ID:33981233
大小:9.79 MB
页数:64页
时间:2019-03-03
《平邑甜茶凋亡基因bag,dad和hsp70的克隆及其对镉和渗透胁迫的响应》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、山东农业大学硕士学位论文平邑甜茶凋亡基因BAG,DAD和HSP70的克隆及其对镉和渗透胁迫的响应姓名:沈伟申请学位级别:硕士专业:果树学指导教师:杨洪强20120608山东农业大学硕士学位论文中文摘要平邑甜茶(Malushupehensis(Pamp)Rehd.varpinyiensisJiang)是我国特有的植物资源,常用作苹果和观赏海棠的砧木。本研究以平邑甜茶为试材,克隆了MhBAG,MhDAD和MhHSP70基因的全长eDNA序列,并运用生物信息学手段分析了其基因序列与编码蛋白的性质和功能;同
2、时,研究了它们在重金属、盐及干旱胁迫下的表达情况,并对细胞凋亡率进行了测定。成功构建了MhBAG,MhDAD基因正反义表达载体并转化拟南芥,获得转基因拟南芥植株。主要结果如下:1)获得了平邑甜茶MhBAG基因,该基因eDNA全长1841bp,含有1017的完整开放阅读框,编码338个氨基酸,GenBank登录号为HQ639935。2)获得了平邑甜茶MhDAD基因,该基因eDNA全长546bp,含有360的完整开放阅读框,编码119个氨基酸,GenBank登录号为JN390964。3)获得了平邑甜茶M
3、hHSP70基因,该基因eDNA全长2307bp,含有1953的完整开放阅读框,编码650个氨基酸,GenBank登录号为HQ876864。4)半定量RT-PCR结果表明,在硫酸镉胁迫、盐胁迫以及干旱胁迫下,随胁迫程度的加剧,MhBAG、MhDAD的表达量逐渐下降,MhHSP70的表达量则呈现上升趋势,测定细胞凋亡率亦逐渐增加。5)构建了pET-30a.MhBAG原核表达载体,进行了原核表达实验,测定MhBAG蛋白大小为37kD。6)构建了pBll21.MhBAG正反义表达载体,并通过花序侵染法转化
4、拟南芥,通过抗性筛选和PCR检测,得到转基因再生阳性植株。7)构建了pBll21.MhDAD正反义表达载体,并通过花序侵染法转化拟南芥,获得To代种子。关键词:平邑甜茶:PCD;MhBAG基因;MhDAD基因:MhHSPTO基因;拟南芥转化:RT-PCR平邑甜茶抗凋亡基因BAG,DAD和HSP70的克隆及其对镉和渗透胁迫的响应CloningofAnti-ApoptosisGenes-BAG,DADandHSP70fromMalushupehensis(Pamp)Rehd.andTheirRespon
5、setotheStressofCadmiumand0smosisAbstractMalushupehensis(Pamp)Rehd.varpinyiensisJiang(ChinesenameisPingYiTianCha,PYTC)wastheuniqueresourceinOurcountry,whichWasusedwidelyasacommonrootstockot’appleandornamentalcrabapple.Inthisthesis,thefull-lengtheDNAofMh
6、BAG,MhDAD.MhHSP70genewereisolatedbasedonthematerialsofPYTC,thecharacterandfunctionofthegenesequenceandtheproteinthatitencodedWasanalyzedbybioinformatics.Atthesametime,theirexpressionpaRemsandthechangemndencyofapoptosisrateundercadmiumandosmosissressesW
7、asstudied.Otherwise,traasgerficArabidopsisthalianatransformedwithpBI121vectorofMhBAG,MhDADgenewasobtainedbyfloraldiptrans.formation.1)ThefulllongtheDNAofMhBAGWasobtained.Accordingtothehomologoussequencesfromotherplants,degenerateprimersweredesignedtoam
8、plifyspecificDNAfragmentusingcDNApreparedfromPYTCroots.MhBAGwas1841bpinlength,containinganopenreadingframeof1017bpandencoding338aminoacids,andtheaccessionnumberofGeneBankWasHQ639935.2)ThefulllongtheDNAofMhDADWasobtained.Accordingtotheho
此文档下载收益归作者所有