mptp对不同年龄快速老化小鼠黑质纹状体系统cox-2表达的影响

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2、。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：撕7导师签章：Z编弓陟如l弓年≥月1}日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．4研究论文MPTP对不同月龄快速老化小鼠黑质纹状体系统COX-2表达的影响前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．8月lJ吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．8材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．12多日7I≮⋯⋯⋯⋯⋯⋯··⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··上厶附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．14讨论⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．18结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．25参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．25综述环氧化酶(COX一2)对帕金森病神经变性的影响⋯⋯⋯⋯．．29致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．37个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38中文摘要MPTP对不同龄快速老化小鼠SAMP8黑质纹状体系统COX-2表达的影响摘要目的：探讨卜甲基一4一苯基一1，2，3，6一四氢吡啶(卜methyl一4一phenyl1，2，3，6tetrahydropyridine，MPTP)对不同月龄快速老化小鼠(senescen

4、ce-acceleratedmouseprone8，SAMP8)急性损伤后黑质纹状体系统环氧化酶一2(cyclooxygenase一2，COX一2)的表达。进一步来研究老化及外界环境毒物对帕金森病病理反应过程的影响。方法：1实验动物分组与模型制备选用健康雌性SAMP8小鼠3、6、10月龄各36只，随机分为：生理盐水对照组和MPTP用药组各18只，小鼠背部皮下注射MPTP(Sigma，USA)，每次14mg·kg‘1(生理盐水溶)，连续注射4次，每次间隔2h；对照组每次均注射等体积无菌生理盐水。每组分别于第1次注射后1、3、7d三个时间点处死，每

5、组每个时间点6只，。2行为学检测2．1旷场实验采用旷场实验检测各组小鼠给药后1、3、7d的自主活动水平。实验时将小鼠置于方箱的正中央，观察其5min内活动情况，记录其垂直站立次数(前肢离开地面1cm以上的次数)与水平穿格次数(三爪以上跨入邻格)。每只小鼠实验结束，用90％酒精擦拭实验装置，以免留下气味影响其它小鼠。2．2采用滚轴实验检测其运动协调功能。用药后第1天，第3天，第7天，分别以16、20、24、28、32rpm测定受试小鼠在转轴上滑落之前停留的时间，最长测试时间为150S。记录其停留时间，并计算overallrotarodperfor

6、mance(ORP)值，公式为ORP=E((a+b)／2)xC，其中a、b分别为动物在较低和较高速度上停留的时间，c为相邻两个速度的差值。3标本留取中文摘要体积分数10％水合氯醛麻醉小鼠，从眼球取血，离心取血清；之后迅速断头取脑，在冰上剥离出中脑黑质、纹状体组织，电子天平称重，置于液氮中冷冻。血清与组织均置于-80℃保存备用。4COX-2血清水平的检测采用双抗夹心酶联免疫法(ELISA)测定各组小鼠血清中COX一2的含量。样品及标准品均采用复孔，最终反应底物用酶标仪比色测定。以吸光度值为纵坐标，标准品浓度为横坐标，绘制出标准曲线，求出标准曲线方

7、程(y=Ax“2+Bx+C，A=一0．0003，B=O．0587，C=一0．1555：R=O．9990)。5COX-2mRNA含量的检测采用半定量RT-PCR方法测定。①总RNA提取：按Trizol试剂说明书要求，采用一步法提取总RNA。采用1．5％琼脂糖凝胶电泳，紫外投射仪观察18S和28S两条RNA条带，鉴定RNA质量；分光光度计测定RNA浓度。②RT：取2ug总RNA，按逆转录试剂盒说明书要求操作，合成aDNA。20ul反应体系，反应条件为：42℃60min，70℃10min。⑧PCR扩增：COX-2基因上游引物为：5’一CAGCAAAT

8、CCTTGCTGTTCC一3’，下游引物为：5’一TGGGCAAAGAATGCAAACATC一3’；B—actin为内参照，上游引物为：5’一TCAG