ghrelin对mptp小鼠帕金森病模型黑质th、bcl2和baxmrna表达的影响

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1、Ghrelin对MPTP小鼠帕金森病模型黑质TH、Bcl2和BaxmRNA表达的影响【摘要】目的探讨Ghrelin对1甲基4苯基1，2，3，6四氢吡啶（MPTP）造成的黑质（SN）多巴胺能神经元损伤的保护作用及可能机制。方法小鼠随机分为对照组、MPTP组和Ghrelin+MPTP组。腹腔注射MPTP制备帕金森病小鼠模型；Ghrelin+MPTP组于MPTP注射前，侧脑室微量注射Ghrelin200ng，共8d；对照组以等量生理盐水取代Ghrelin和MPTP。应用半定量RTPCR技术检测各组小鼠SN

2、内酪氨酸羟化酶（TH）、Bcl2和BaxmRNA的表达情况。结果MPTP导致小鼠SN内THmRNA的表达明显低于对照组(F=34.77，q=11.91，P<0.01)，Ghrelin预处理小鼠SN内THmRNA表达量较MPTP组明显增加(q=5.05,P<0.01)。MPTP导致小鼠SN内Bcl2/Bax由对照组的1.13±0.03减少至0.47±0.06(F=111.59，q=17.58,P<0.01)，Ghrelin预处理小鼠Bcl2/Bax明显高于MPTP组(q=18.94,P<

3、;0.01)，可恢复至正常水平。结论Ghrelin预处理对于MPTP造成的TH基因表达量减少有改善作用，该作用可能通过抗凋亡途径实现。【关键词】Ghrelin帕金森病1甲基4苯基四氢吡啶酪氨酸单氧化酶细胞凋亡［ABSTRACT］ObjectiveToinvestigatetheeffectofGhrleinontyrosinehydroxylase(TH),Bcl2andBaxmRNAexpressionofthesubatantianigrain1methy4phenyl1,2,3,6tetr

4、ahydropyridine(MPTP)inducedmousemodelofParkinsondisease.MethodsEighteenhealthymaleC57BL/6mice：Control,MPTPandGhrelin+MPTP.ThemiceinMPTPgroupg/kg,i.p.),oncedailyforfivedays,alsaline.ThetotalmRNAofthesubstantianigra(SN)RNAexpressionofTH,Bcl2andBaxbysemiquant

5、itivereversetranscriptionpolymerasechainreaction.ResultsparedRNAexpression(P<0.01).PretreatedRNAexpressionparedRNAexpressioninducedbyMPTP.Theantiapoptoticpathightbethemechanismofthisneuroprotectiveeffect.［KEYA等[2]于1999年发现的一种脑肠肽,由28个氨基酸组成，为生长激素促分泌素受体(GHS

6、R)的内源性配体,有刺激食欲、促进摄食、减少能量消耗、增加体质量的作用。最近的研究表明，Ghrelin能够刺激多种细胞的增殖并能抑制凋亡。ZIGMAN等[3]利用组织原位杂交技术检测Ghrelin功能性受体——GHSR1amRNA在大小鼠脑内的分布，发现在SN的TH免疫阳性神经元上有GHSR1a的表达。为研究Ghrelin是否具有保护PD动物模型SN内DA能神经元的作用，本实验应用半定量逆转录聚合酶链反应（RTPCR）技术，对1甲基4苯基1，2，3，6四氢吡啶（MPTP）制备的C57BL/6小鼠P

7、D模型SN内酪氨酸羟化酶（TH）、Bcl2和BaxmRNA表达量进行了检测，对Ghrelin的神经保护作用及其可能的机制进行了初步探讨。1材料与方法1.1材料MPTP、Ghrelin（Sigma公司），TRIzol试剂（Gibico公司），逆转录试剂盒（Promega公司），TagDNA聚合酶以及DNAMarkerDL2000（TAKARA公司）。1.2动物分组选择健康雄性C57BL/6小鼠18只，8～10周龄，体质量（20±2）g，由北京维通利华实验动物有限公司提供,其合格证号为：scxk（京）200200

8、03。置于（19±2）℃室温下，安静环境饲养，昼夜循环光照，自由饮水、取食。采用完全随机分组方法将小鼠分为对照组、MPTP组和Ghrelin+MPTP组共3组，每组6只。1.3单侧侧脑室埋管术术前所有小鼠禁食12h，以80g/L水合氯醛（400mg/kg）腹腔注射麻醉小鼠，充分暴露颅骨，参考GEORGE等编著的《小鼠脑立体定位图谱》（2001）以三棱针于颅骨表面侧脑室代表