核因子nfκb对帕金森病mptp模型小鼠黑质c

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1、核因子NFκB对帕金森病MPTP模型小鼠黑质C【摘要】目的:研究核因子（NFκB）在1甲基4苯基1,2,3,6四氢吡啶(MPTP)所致小鼠帕金森病(PD)模型中的影响和对环氧合酶2(COX2)的表达调控作用以及人参皂甙Rg1对其的影响，探讨导致多巴胺(DA)能神经元变性失活的可能机制.方法:采用MPTP制备亚急性PD小鼠模型,用免疫组织化学法和免疫蛋白印迹法观察小鼠黑质区酪氨酸羟化酶(TH),COX2，前列腺素E2（prostaglandine2，PGE2）以及NFκB的表达变化；并观察给予人参皂甙Rg1对上述变化的影响.结

2、果:与对照组小鼠相比,模型组小鼠出现典型PD症状,在MPTP第5次注射后24h，黑质区NFκB（34.6±5.6），COX2（28.2±5.1）,PGE2(36.1±4.2)阳性细胞较对照组NFκB（2.5±0.8），COX2（1.0±0.3）,PGE2(3.2±0.4)阳性细胞显著增加(P<0.01),TH阳性神经元显著丢失60%(P<0.01)；经人参皂甙Rg1处理后,模型组小鼠PD症状减轻,与模型组比较,黑质区NFκB（4.9±2.1），COX2（1.9±0.7）,PGE2(4.6±0.3)阳性细胞明显减少(P<

3、;0.01)，TH阳性细胞数较对照组仅下降32%.结论:核因子NFκB在亚急性PD模型早期对黑质COX2表达中可能起重要调控作用；人参皂甙Rg1可能影响NFκB及C0X2表达而对小鼠多巴胺神经元起一定保护作用.【关键词】帕金森病；炎症；环氧合酶2；前列腺素E2；核因子NFκB；人参皂甙Rg10引言帕金森病(parkinsonsdisease，PD)是一种常见的中枢神经系统变性疾病.有研究［1］认为,炎症可能在PD发病过程中起重要作用,环氧合酶2(cyclooxygenase2，COX2)及其介导的炎症反应可能参与PD发病过程［

4、2］.核因子(nuclearfactorκappaB,NFκB)在炎症反应过程中发挥重要作用，近期的研究显示NFκB的激活与PD发病有关［3］.但有关NFκB是否参与PD模型中COX2表达调控的报道少见.本研究采用1甲基4苯基1,2,3,6四氢吡啶（1methyl4phenyl1,2,3,6tetrahydropyridine,MPTP）制备亚急性PD模型,观察模型动物中脑黑质NFκB和COX2及其产物前列腺素E2（prostaglandine2，PGE2）表达与小鼠黑质区酪氨酸羟化酶(tyrosinehydro

5、xylase，TH)阳性神经元数量关系及给予人参皂甙Rg1后对上述变化的影响,探讨NFκB在PD发病过程中的分子机制，为探索PD有效防治措施提供线索.1材料和方法1.1材料健康雄性C57BL/6N小鼠45只，8~12a公司)；兔抗人PGE2mAb(美国Cayman公司)；小鼠抗人THmAb(美国Chemicon公司)；人参皂甙Rg1（吉林大学基础医学院化学教研中心）；兔抗人COX2mAb,兔抗人NFκB（p50）多克隆抗体,浓缩型免疫组织化学超敏UltraSensitiveTMSP试剂盒(福州迈新生物).1.2方法1.2.1动物分组和模型制

6、备实验随机将小鼠分为3组，每组15只.模型组(PD组)：给予MPTP30mg/kg,盐水溶，腹腔注射,1次/d,连续5d.人参皂甙Rg1干预组(Rg1组)：除给予PD组相同的MPTP处理外,MPTP注射前3d定时给予人参皂甙Rg110mg/kg,盐水溶，腹腔注射，并在MPTP注射前2h注射人参皂甙Rg1.溶剂组（对照组）：注射与PD组和Rg1组等体积的盐水.上述动物均于MPTP第5次注射后24h处死.于每次注射药物后观察小鼠是否出现静止震颤、肌肉僵直、运动迟缓等PD行为学表现,判断PD鼠模型是否成功.1.2.2免疫组织化学检测小鼠麻醉后,行40g

7、/L多聚甲醛磷酸盐缓冲液常规灌注固定,迅速开颅取脑,40g/L多聚甲醛固定48h(4℃)后,石蜡包埋切片.实验时取脑组织切片常规脱蜡至水后,用TBST(pH7.4±0.2)洗涤；组织抗原行水浴法热修复；30mL/L过氧化氢阻断内源过氧化物酶,正常非免疫动物血清室温孵育10min；同一组织相邻切片分别加入一抗即兔抗人COX2mAb(1∶100)、兔抗人PGE2mAb（1∶300）、兔抗人NFκB（p50）多克隆抗体（1∶100）、小鼠抗人THmAb(1∶400),4℃过夜；TBST洗涤后,加入生物素标记第二抗体室温孵育；TBST洗涤,加入链霉素

8、抗生物素蛋白过氧化酶室温孵育20min,DAB显色,中性树胶封固,光镜下观察照相.1.2.3arker为参照，依Mr大小切取条带,取相