calbindin-d-28k对mptp致小鼠黑质凋亡相关蛋白bax表达的影响

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1、Calbindin-D-28k对MPTP致小鼠黑质凋亡相关蛋白Bax表达的影响作者：高锦，朱园园，刘美英，高殿帅【摘要】目的探讨在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)致小鼠黑质多巴胺(DA)能细胞发生凋亡时，calbindin-D-28k(CB)抗细胞凋亡的作用机制。方法MPTP连续5天腹腔注射构建中脑黑质DA能细胞损伤的小鼠模型，模型鼠脑黑质致密部立体定位注射携带CB基因的高滴度慢病毒颗粒(CB-HIV-Ⅰ)，Westernblotting方法检测CB的在体过表达以及鼠脑黑质部位凋亡相关蛋白Bax的表

2、达变化。结果与空白对照组(control)和黑质定位注射空病毒颗粒组(HIV-Ⅰ)相比，注射CB-HIV-Ⅰ的实验组的黑质中CB的表达量显著升高(P<0.05)，而Bax的表达量明显降低(P<0.05)。结论病毒颗粒CB-HIV-Ⅰ携带的CB基因在黑质细胞中获得了高效的表达;凋亡相关蛋白Bax可能参与了CB对黑质DA能神经细胞的保护作用。【关键词】calbindin-D-28k;细胞凋亡;Bax　　Abstract:ObjectiveToinvestigatetheanti-apoptoticmechanism

3、ofcalbindin-D-28k(CB)intheMPTP-inducedapoptosisofdopaminergic(DA)neuronsinmidbrainsubstantianigrainmice.MethodsMPTPwasinjectedintotheperitonealcavityin95consecutivedaystoestablishaninjurymodelofDAneuronsinthemidbrainsubstantianigrainmice,andhightiterlentiviruspart

4、iclescarryingCB(CB-HIV-Ⅰ)wereinjectedintothemidbrainsubstantianigrabystereotaxicapparatus.WesternblottingwasusedtoanalyzetheexpressionlevelsofCBandapoptosis-relatedproteinBaxinsubstantianigra,respectively.ResultsTheexpressionlevelofCBincreased(P<0.05),whilethat

5、ofBaxdecreasedinCB-HIV-ⅠgroupscomparedwithcontrolgroupsandHIV-Ⅰgroups(P<0.05).ConclusionThelentivirusparticlesofCB-HIV-Ⅰwerehighlyexpressedinsubstantianigracells;apoptosis-relatedproteinBaxmightparticipateintheprotectiveeffectofCBonDAneuronsinsubstantianigra.　　

6、Keywords:calbindin-D-28k;cellapoptosis;Bax　　帕金森病(Parkinson′sdisease,PD)是一种多发于老年人群并有向中年人群移行趋势的中枢神经退行性疾病，以黑质多巴胺能神经细胞进行性缺失导致多巴胺分泌功能降低[1-2]，以及多巴胺神经元胞体内产生一种称为路易小体的包涵体为主要病理特征[3-4]。目前尚无根治此病的有效方法。近年来基因治疗PD显示了良好的潜力和应用前景。9　　研究表明：含有维生素D依赖性钙离子结合蛋白(Calbindin-D-28k,CB)的中脑多巴胺(do

7、pamine,DA)能神经细胞对6-OHDA引起的PD动物模型中脑黑质DA能细胞损伤具有明显的耐受性[5];但其在DA能神经细胞中的表达较少[6]。Ⅰ型人免疫缺陷病毒(HIV-Ⅰ)作为慢病毒载体的一种，经历了长期的优化过程，现已改造成4质粒表达系统，因其对非分裂细胞的感染率显著提高及生物安全性能进一步得到保障等优点正逐渐受到科学家们的青睐[7]。本室前期利用改装的此慢病毒携带CB基因使其在黑质DA能神经细胞中特异性过表达，获得了高滴度病毒颗粒(CB-HIV-Ⅰ)。　　本研究利用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(

8、MPTP)所致的中脑黑质细胞损伤小鼠，鼠脑黑质致密部定位注射CB-HIV-Ⅰ病毒颗粒，使其在黑质DA能神经细胞中特异性过表达，观察过表达的CB对黑质DA能神经细胞中Bax表达量的影响，以进一步探讨CB对DA能神经细胞的保护作用机制。　　1材料和方法　　1.1中脑黑质细胞损伤小鼠制作及处理C57BL/6小