aldh1a2在结肠癌中的表达及对结肠癌细胞生物学的作用

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1、Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofDoctorTheExpressionofALDHlA2inColonicCancerandRoleofALDHlA2inBiologicalFunctionofColonicCancerCellByWanguangYangSupervisor：Prof．XiefuZhangClinicalMedicineTheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityOctober,2011原创性声明本人郑重声

2、明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。靴敝储：阿醐：刎¨咱“日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他

3、复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。靴做储：聊嗍：训年厂肌佃摘要ALDHlA2在结肠癌中的表达及对结肠癌细胞生物学的作用博士研究生：杨万广导师：张谢夫教授郑州大学第一附属医院胃肠外科河南郑州450052结肠癌是常见的严重威胁人类健康的消化道恶性肿瘤。目前结肠癌的治疗手段以手术治疗为主，辅以全身或局部放、化疗，但术后肿瘤易复发。提高结肠癌术后生存率和降低死亡率的关键在于早期发现、早期诊断和早期治疗。深入研究大肠癌相关基因的表达并对其机理进行研究，有

4、利于大肠癌的综合防治。乙醛脱氢酶家族包含由17个基因翻译成的一组同工酶，可分别催化不同底物，广泛分布于肝、肠等多种组织中。研究结果显示：ALDHl与肿瘤的发生、发展密切相关。ALDHlA2是催化视黄醛氧化成维甲酸的关键酶，维甲酸与维甲酸受体(retinoicacidrecept01"，RAR)以及维甲酸X受体(retinoicXreeeptora，RXR)通过配体结合区域结合，直接作用于靶基因，调节不同靶基因的表达，进而调控正常和肿瘤细胞的生长和分化。大量研究表明：ATRA可抑制肿瘤细胞生长、浸润、转移及粘附，使肿瘤细胞致瘤性及软琼脂克隆形成能力下降，使胃癌细胞株MKN

5、45H对基底膜胶的粘附能力下降，并显著降低原胶原、纤维结合素及层粘连蛋白的合成，在抑制肿瘤的侵袭、转移过程中起着重要作用，ALDHIA2是体内合成ATRA的关键酶，我们设想ALDHlA2在抑制结肠癌细胞增殖、侵袭转移及粘附过程也将起着重要作用。基质金属蛋白酶(Matrixmetalloproteinase，MMPs)是一类具有降解细胞外基质和基底膜能力的蛋白水解酶，在肿瘤细胞突破基底膜屏障而浸润、转移中起摘要重要作用，在肿瘤演进等众多生理和病理过程中均发挥着重要的作用。研究发现，在许多肿瘤组织中，都发现有较高MMP2的表达，且其表达程度与肿瘤的侵袭性有关。E—cadhe

6、rin是介导上皮细胞间粘附的主要粘附分子，主要介导同质性细胞粘附，如瘤细胞与瘤细胞之间的粘附，因此E-cadherin表达减少，有助于肿瘤侵袭转移。本研究中，我们首先利用免疫组化技术、逆转录-PCR技术及免疫印迹技术测定人结肠癌及癌旁组织中ALDHlA2、MMP2和E-cadherinmRNA及蛋白的表达情况；随后利用基因扩增技术获得人ALDHlA2基因cDNA序列，构建pEGFP．N1．ALDHlA2表达载体并转染到人结肠癌细胞株LOVO细胞，获得稳定携带pEGFP-N1．ALDHlA2载体的LOV0，测定转染前后细胞中ALDHlA2mRNA及蛋白的表达，并利用紫外分

7、光技术测定转染前后细胞中ALDHlA2的活性；采用MTT实验、克隆形成实验、Transwdl小室侵袭实验、逆转录．PCR技术、免疫荧光技术及免疫印迹技术检测pEGFP-N1．ALDHlA2载体转染后对细胞增殖能力、克隆形成能力、侵袭能力的影响，并检测侵袭、粘附相关因子的表达，同时用ATRA作为阳性对照；最后为进一步研究ALDHlA2在结肠癌的作用机制，我们利用转染的细胞构建裸鼠移植瘤模型，观察不同裸鼠成瘤时间、瘤体平均体积，平均瘤重的不同，探讨ALDHlA2在体内对结肠癌的影响，以期找到ALDHlA2在结肠癌中的作用机制。本研究分为以下四