先天性心脏病患儿中染色体22q11.2拷贝数变异的研究

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1、中图分类号UDCR654．2610八年制博士学位论文学校代码密级先天性心脏病患JL,染色体22q11．2拷贝数变异的研究10533CopyNumberVariationsatChromosome22q11．2inChildrenwithCongenitalHeartDisease作者姓名：王首正学科专业：临床医学研究方向：外科学学院(系、所)：湘雅-K院指导教师：杨一峰教授答辩委员会主席覆兰生中南大学二。一三年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究j工：作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特NDi：I以标注和致谢的地方外，论文中

2、不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：至当垂．日期：二冱生年』月』曰学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：墨

3、叠丝导师签塑二多徊期：丝年』月』日先天性心脏病患儿中染色体22q11．2拷贝数变异的研究摘要背景：22q11．2区域因存在低拷贝重复序列(Lowcopyrepeats，LCRs)，易发生染色体的不等交换重排，引起基因拷贝数变异(CopyNumberVariants，QWs)。以LCR22。4为界分为近端和远端CNVs，其中LCR22．4近端微缺失是目前已知的导致心脏畸形发生最常见的遗传因素之一，其在新生儿中的发病率约为1／4000。22ql1．2区域CNVs引起包括心脏畸形在内的异常表型发生的根本原因是这个区域以TBXl为主的基因剂量的改变。22ql1．2CNV

4、s相关综合征表型差异性大，患儿可能仅表现出心脏畸形，也可能同时合并有其他畸形，如肺动脉发育不良、免疫缺陷、喂养困难、精神行为障碍等。因此对于合并有22ql1．2区域CNVs的先天性心脏病儿，应及时发现其他畸形和染色体异常，评估手术风险。国内也有先天性心脏病患儿中22q11．2近端微缺失的研究，但样本量较小，且检测手段多用耗时费力的荧光原位杂交技术。本研究将筛查位点定位于TBXl，利用荧光实时定量PCR技术，对642名先天性心脏病患儿进行22q11．2近端CNVs的筛查，再利用Array—SNP高通量测序技术对定量PCR筛查阳性患儿进行确诊，并获得具体CNVs数据

5、。本研究可获得这种染色体异常在各种先天性心脏病患儿中的分布频率，并探讨基因型和表型的关系；同时比较了合并有22q11．2近端CNVs的法洛四联症患儿与非综合征型(无CNVs)法洛四联症患儿术前评估指标的差异，探讨了22q11．2近端CNVs的基因型对一期根治术治疗法洛四联症术后早期疗效的影响。第一章先天性心脏病患／L中22q11．2近端CNVs分布频率的研究及表型分析目的：研究先天性心脏病患儿中22q11．2区域近端CNVs的分布频率，试图发现22q11．2近端区域不同CNVs所致表型差异，探讨基因型与表型关系。研究对象：2012年4月到2012年12月就诊于中

6、南大学湘雅二医院心胸外科的先天性心脏病患儿。其中，男性340名，女性302名。研究方法：利用美国QIAGEN公司gDNA提取试剂盒，按照其标准程序对642例患儿进行外周静脉血gDNA提取。利用美国AppliedBiosystems公司生产的ABIStepone定量PCR仪实行SYBR⑧GreenI嵌合荧光法实时定量PCR，对642例患儿进行22q11．2近端CNVs的筛查。对筛查阳性患者利用美国illumina公司生产的Array．SNP高通量芯片(Human660W-Quad、HumanOmni1-quad)，进行全基因组CNVs分析，获得具体CNVs数据。结

7、果：642例先天性心脏病患儿中，共发现了52例22q11．2近端微缺失患儿(8．1％)，其中43例为LCR22．2到LCR22—4区间，大小为3Mb的缺失，9例为LCR22—2到LCR22．3a区间，大小为1．5Mb的缺失。另外也发现了5例微重复患者(O．8％)，其重复片段为LCR22．2到LCR22—4区间，大小为3Mb的重复。出现22ql1．2微缺失比例由高到低的先天性心脏病依次为共同动脉干(2／5，40％)、法洛四联症合并肺动脉闭锁、动脉导管未闭(3／8，37．5％)、主动脉弓中断(1／3，33．3％)、法洛四联症(16／53，30．2％)、部分性肺静脉畸

8、形引流(1／5，20％)