kiaa1267和prh1基因拷贝数变异与先天性心脏病相关性的研究

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1、苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：幽El期：勉f盖二兰二至立㈣剃苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息

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3、PRHl(proline-richproteinHaemsubfamily1)基因拷贝数变异(Copynumbervariations，CNVs)在人群中的发生率，探讨其与先天性心脏病的相关性。方法：本研究以散发的330例先天性心脏病(CongenitalHeartDisease，CHD)患儿和一个CHD家系、300例』下常对照为研究对象，采用实时荧光定量PCR(Real-timePolymeraseChainReaction，Real-timePCR)技术对前期实验中采用微阵列比较基因组杂交芯片(array-basedComparativeGenomicHybridization，

4、aCGH)筛选出的候选基因KIAAl267和职日J扩大样本量进行验证，检测其在人群中拷贝数变异情况及发生率，并进行统计学分析。结果：1．散发性先天性心脏病患儿样本KIAAl267基因拷贝数检测及统计分析：(1)330例先天性心脏病患儿样本经KIAAl267—1、KIAAl267-2两对引物检测及三复孔验证，确定检出8例样本在KIAAl267基因区域有片段缺失，322例样本未见拷贝数异常。正常对照组300例样本在KIAAl267基因区域均未检出片段缺失。(2)对检测出有片段缺失的8例阳性样本采用KIAAl267-3和KIAAl267_6引物进行边界定位，发现8例样本存在大小不等的片段缺

5、失，其中编号为10HDl73—1和10HD318一l的样本在引物KIAAl267-2所在区域附近还存在多拷贝的变异，即缺失和扩增并发。(3)先天性心脏病实验组KIAAl267基因拷贝数变异率大于正常对照组(X2=0．008，P<0．01)。2．散发性先天性心脏病患儿样本PRHl基因拷贝数检测及统计分析：(1)采用PRHl-2引物(扩增片段位于PRHl基因上游)进行检测，在200例中文摘要KIAAl267和PRHl基因拷贝数变异与先天性心脏病相关性的研究先天性心脏病患儿样本中检出零拷贝59例(29．50％)，单拷贝23例(11．50％)，双拷贝98例(49．00％)，多拷贝20例(10

6、．00％)；于120例正常对照样本中检出零拷贝14例(11．67％)，单拷贝23例(19．17％)，双拷贝77例(64．17％)，多拷贝6例(5．00％)。对两组样本的检测结果根据拷贝数情况分为四个等级进行统计，并运用统计软件SPSSl7．0进行两独立样本等级资料比较的秩和检验，得出Z=-4．386，P<0．01，具有显著差异，即先天性心脏病实验组PRHl基因拷贝数变异率大于正常对照组。(2)经三复孔验证及PRHl基因上游序列的引物PRHl-3、PRHl-4验证，与以上实验结果相同。(3)对上述实验检测结果为单拷贝的阳性样本用PRHl-5引物(扩增片段位于PRHl基因内)进行检测，结

7、果全部为双拷贝。3．先天性心脏病家系两基因检测情况：(1)CHD家系中四人(I1、I2、II3)在KIAAl267基因区域均未检出片段缺失或扩增。(2)家系中I2、II2样本基因组DNA在以PRHl-2为引物的实验中为零拷贝，I1、II3则为单拷贝；在以PRHl-5为引物的实验中四人均为双拷贝。结论：1．KIAAl267基因经检测及统计学分析，提示两组样本实验结果有显著差异(X2--0．008，P