飞虱类虫草共生菌分类地位及共生真菌多样性研究

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1、分类号：S763单位代码：10364密级：学号：11720260安徽农业大学学位论文飞虱类虫草共生菌分类地位及共生真菌多样性研究StudiesonphylogeneticpositionsofCordyceps-likesymbiotesandthediversityofendosymbiontsinplanthoppers研究生：王瑶指导教师：黄勃教授合作指导教师：申请学位门类级别：农学硕士专业名称：森林保护学研究方向：真菌学与资源微生物学所在学院：林学与园林学院答辩委员会主席：二零一四年六月万方数据独创性声明本人声

2、明所呈的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得安徽农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解安徽农业大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子文件，允许论文被查阅和借阅。本人授权安徽农业大学

3、可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，收录到《中国学位论文全文数据库》，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，向社会公众提供信息服务。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）。学位论文作者签名：指导教师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日学位论文作者毕业后去向：工作单位：电话：通信地址：邮编：万方数据摘要长期以刺吸植株韧皮部汁液为食的飞虱，其体内均存在大量共生菌。类酵母共生菌（Yeast-likesymbiotes，YLS）是存在于飞虱体内的优势菌群，它们为寄主提供氨基酸、固醇类物质以及

4、蛋白质等多种营养成分，保证飞虱的正常生长和繁殖。已有研究证明，飞虱体内存在多种YLS，其中有一种为类虫草共生菌，但其在真菌中分类地位还未完全确定。本研究运用多基因位点的分子系统发育分析方法，确定了飞虱类虫草共生菌的分类地位。同时，本研究利用对飞虱内生真菌nuc-SSU、nuc-LSU和EF-1α基因克隆和序列比对分析的方法，首次对烟翅白背飞虱SogatellaKolophon、长绿飞虱Saccharosydneprocerus和黑边梅塔飞虱Metadelphaxpropinqua体内共生真菌的多样性进行了研究。现将主要

5、结果陈述如下：1．通过形态特征的观察，将采集来的宿主飞虱鉴定为7属11种，它们分别是：褐飞虱属的褐飞虱、拟褐飞虱、伪褐飞虱；白背飞虱属的白背飞虱、稗飞虱、烟翅白背飞虱；灰飞虱属的灰飞虱；梅塔飞虱属的黑边梅塔飞虱；长飞虱属的长绿飞虱；白条飞虱属的白条飞虱以及纹翅飞虱属的黑斑纹翅飞虱。2．通过nuc-LSU、nuc-SSU、EF-1α、RPB1、RPB2五基因位点的分子系统发育分析，发现以飞虱为宿主的类虫草共生菌落在线虫草科Ophiocordycipitaceae中线虫草属Ophiocordyceps内，并与O.sphec

6、ocephala形成姐妹类群，因此基于多基因位点的证据我们将类虫草共生菌归为线虫草属Ophiocordyceps。基于nuc-SSU单基因方法对9种飞虱体内的类虫草共生菌进行了进一步的分子鉴定，结果表明这些类虫草共生菌至少存在三个种：（1）褐飞虱线虫草Ophiocordycepsnilaparvata（暂命名），宿主为褐飞虱、拟褐飞虱、伪褐飞虱，菌丝段以长椭圆形为主，并少量存在棒形和洋梨形这两种形态；（2）白背飞虱线虫草Ophiocordycepssogatella（暂命名），宿主为白背飞虱、稗飞虱、烟翅白背飞虱、黑边

7、梅塔飞虱和白条飞虱，菌丝段主要为椭圆形，长椭圆形较少，并且有类似花生或葫芦的形态；（3）灰飞虱线虫草Ophiocordycepslaodelphax（暂命名），宿主为灰飞虱，菌丝段以椭圆形和扁圆形为主要形态，少量存在洋梨形菌丝段。3．通过EF-1α部分序列的分子系统发育分析，宿主为黑斑纹翅飞虱的类虫草共生菌在类虫草共生菌分类单元中形成一个单系分支，而通过对菌丝段形态特征的比较，发现其与上述三种类虫草共生菌存在着明显的差异。黑斑纹翅飞虱体内类虫草共生菌的形态有椭圆形、长椭圆形、卵形、扁圆形和葫芦形，而葫芦形共生菌大量存在

8、，其数量明显多于其它飞虱。因此基于形态和分子数据宿主为黑斑纹翅飞虱的类虫草共生菌可能为一新种，但需要更多的基因数据支持。I万方数据4．通过利用nuc-SSU、nuc-LSU和EF-1α三基因位点对烟翅白背飞虱、长绿飞虱和黑边梅塔飞虱共生真菌多样性的研究，结果表明烟翅白背飞虱腹部脂肪体内可能存在类虫草共生菌、热带假丝酵母（Candi