鹰嘴豆芽素a对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌外排系统的抑制作用

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1、分类号：密级：学校代码：10165学号：201llll83遣掌师耗犬擎硕士学位论文②鹰嘴豆芽素A对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌外排系统的抑制作用作者姓名：学科、专业：研究方向：导师姓名：陈禹先微生物学———1n嘲jr2014年03月学位论文独创性声明本人承诺：所呈交的学位论文是本人在导师指导下所取得的研究成果。论文中除特别加以标注和致谢的地方外，不包含他人和其他机构已经撰写或发表过的研究成果，其他同志的研究成果对本人的启示和所提供的帮助，均已在论文中做了明确的声明并表示谢意。学位论文作者签名：豫蜀毙学位论文版权的使用授权书本学位论文作者完全了解辽

2、宁师范大学有关保留、使用学位论文的规定，及学校有权保留并向国家有关部门或机构送交复印件或磁盘，允许论文被查阅和借阅。本文授权辽宁师范大学，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库并进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，并且本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。保密的学位论文在解密后使用本授权书。学位论文作者签名：整面啦指导教师躲驰!蝈垒签名日期：力吖缈年E7月弓日辽宁师范大学硕士学位论文摘要主动外排系统是细菌产生多重耐药性的重要机制，它通过将进入胞内的抗生素泵出胞外，降低菌体内药物的有效浓度而使细菌耐药。外排

3、抑制剂可以阻碍细菌对药物的外排作用，它通过与一些抗生素的联合使用来达到治疗目的且不易诱发细菌的抗药性。鹰嘴豆芽素A(BiochaninA)作为一种天然的鹰嘴豆异黄酮，具有外排抑制剂的活性，但其作用机制尚未见相关报道【卜21。本实验就鹰嘴豆芽素A抑制外排的作用机制进行了系统深入的研究，结果如下：(1)通过头孢西丁纸片扩散法和PCR等方法检测了5株l临床分离的MRSA的耐药和外排表型以及基因型，筛选出一株含有外排系统的高耐药株MRSA41577作为下游实验菌株。(2)通过微量肉汤2倍稀释法和体外杀菌实验测定了鹰嘴豆芽素A、环丙沙星以及二者联合使用

4、时的MIC值与杀菌率，结果显示鹰嘴豆芽素A本身并无抑菌活性，但是与环丙沙星具有协同抑菌作用，推测鹰嘴豆芽素A可抑制MRSA41577对环丙沙星的外排作用。(3)通过双平板法比较鹰嘴豆芽素A在环丙沙星含药平板与不含药平板抑菌圈大小的差异(以典型抑制剂利血平作为阳性对照)，初步判断鹰嘴豆芽素A为外排泵抑制剂。(4)通过荧光分光光度法测定鹰嘴豆芽素A对环丙沙星在菌体内蓄积量的影响，结果显示鹰嘴豆芽素A可显著地提高环丙沙星的蓄积量，在15min时比对照组增加了83％(仄0．01)，证明鹰嘴豆芽素A是外排泵抑制剂，且其抑制外排的效果与利血平相当。(5)

5、通过RealtimePCR法检测鹰嘴豆芽素A对外排基因norA表达的影响，实验结果显示，鹰嘴豆芽素A可以使norA基因的相对表达量下降到正常水平以下，证明鹰嘴豆芽素A可以抑制norA基因的转录，进而减少norA外排蛋白的合成。(6)通过SDS—PAGE电泳法和液相色谱质谱联用仪检测鹰嘴豆芽素A对外排蛋白的影响，发现27．9kDa的ABC转运体ATP结合蛋白的合成明显下降，表明鹰嘴豆芽素A可能也通过抑制ABC外排蛋白的合成来抑制细菌对药物的外排作用。关键词：鹰嘴豆芽素A；耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；外排系统；外排抑制剂鹰嘴豆芽素A对耐甲氧西林金黄

6、色葡萄球菌外排系统的抑制作用InhibitionMechanismofBiochaninAonEffiuxSystemofMethicillin-resistantStaphylococcusaureusAbstractEffiuxsystemiSanimportantmechanismofmulti—drugresistantbacteriabywhichtheantibioticsarepumpedoutoftheintracellular,reducingtheeffectiveconcentrationofthedrug．Emuxin

7、hibitorscanblocktheeffiuxofantibioticsandtheyarethroughthecombinationwithsomeantibioticstoachievetherapeuticpurposesanddifficulttoinducebacterialresistance．BiochaninAiSakindofnaturalchickpeaisoftavoneswhichhasawiderangeofbiologicalactivityandpharmacologicaleffects．Asalleffi

8、uxinhibitor,BiochaninAalsohasbeenreported，butmostoftheresearchesarejustpreliminary