溶氧对刺糖多孢菌产多杀菌素的影响及其代谢组学分析

《溶氧对刺糖多孢菌产多杀菌素的影响及其代谢组学分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、溶氧对刺糖多孢菌产多杀菌素的影响及其代谢组学分析MetabolomicsstudiesontheimpactofdissolvedoxygenonthespinosadproductionbySaccharopolysporaspinosa学科专业：生物化工研究生：尹静指导教师：卢文玉副教授天津大学化工学院二零一四年五月万方数据独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢之处外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得天津大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同

2、工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津大学有关保留、使用学位论文的规定。特授权天津大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘。（保密的学位论文在解密后适用本授权说明）学位论文作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日万方数据摘要多杀菌素（Spinosad）是一种新型的大环内酯类抗生素，由刺糖多孢菌经有氧发酵产生，由

3、于其出色的杀虫性能和环保特性具有广泛的应用前景。本论文以提高多杀菌素产量为目的，对其发酵工艺进行了诸多改进，使得多杀菌素产量得到了提高，为工业化奠定了基础。本文以基因工程菌S.spinosaLU104为出发菌株，优化碳源组合，使得多杀菌素产量提高了13.89%。在72h添加0.5%的吐温80进一步提高多杀菌素产量，达到417.96mg/L。在添加吐温80的基础上进行发酵分离耦合实验，在发酵初始加入50g/L的大孔吸附树脂进行吸附，最终多杀菌素产量相比于对照组提高了14.45%。针对刺糖多孢菌发酵的特点对发酵罐进行了结构改进：通过改进回流装置，蒸发速率由10mL

4、/h降低为约4mL/h，发酵液的粘度明显下降，多杀菌素的产量提高了20%。通过在搅拌桨和挡板上包裹纱布，起到了减小剪切力及细胞固定化的作用，使得多杀菌素产量相比于对照组提高了11.17%。为了缓解S.spinosaLU104发酵过程中的溶氧限制，在发酵120h加入0.5%的正十二烷，使得多杀菌素的产量比对照组高出57.8%。为了进一步阐释溶氧对刺糖多孢菌代谢的影响及提高多杀菌素产量的机理，采用GC-MS进行了代谢组学分析。结果表明，正十二烷的添加使得溶氧水平提高，初级代谢的水平增强促进了菌体生长以及次级代谢前体物质和辅因子的合成。由于多杀菌素合成是有氧代谢过程

5、，溶氧的增加也更加有利于提高次级代谢方向的代谢通量。通过流加培养提高多杀菌素产量，120h时开始流加100g/L的葡萄糖，流加总体积为1L，流速为14mL/h，流加时间71.4h。多杀菌素产量达到360.84mg/L，是分批发酵产量的2.29倍。建立了动力学模型描述流加发酵过程中菌体生长、底物消耗及多杀菌素的合成，且实验值和模型拟和值能够较好的吻合，具有很高的拟和度，三个模型方程的相关系数分别为0.9984，0.9855和0.9793。最优条件下，多杀菌素在5L发酵罐的产量达到583.86mg/L，是原始工艺产量的3.72倍。关键词：多杀菌素流加发酵动力学代谢

6、组学万方数据ABSTRACTSpinosadisanewclassofmacrolidecompoundsproducedbyaerobicfermentationoftheGram-positivebacteriaSaccharopolysporaspinosa.Spinosadhasshownbroad-spectruminsecticidalactivityandhasanexcellentenvironmentalandmammaliantoxicological，soitwasappliedwidely.Theaimofthisworkistoinc

7、reasetheproductivityofspinosadfermentation.Aftercultureconditionoptimization,thespinosadproductivityisincreasedgreatly.Thisworkprovidesreferencefortheindustrializationofspinosadfermentation.Inthispaper,thecarbonsourceofgeneticallyengineeredbacteriaS.spinosaLU104wasoptimizedandthepro

8、ductionofspinosadin