il31与特发性肺纤维化信号转导机制研究

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1、分类号坠鱼：坌UDC616编号!Q2窆窆旦!Q!生Q12博士学位论文DoCToR’SDISSERTATIoN@论文题目：坐墨!鱼持堂丝照红丝丝信曼整昱扭剑硒．窒学科专业：监鏖检验途堑堂作者姓名：一．史亘云指导教师：郑全担熬援．答辩日期：三Q二四生盍旦红旦．IL31与特发性肺纤维化信号转导机制研究学科专业申请学位级别作者姓名指导教师论文提交日期论文答辩日期!逝鏖捡验趁匦堂熊±堂僮塞亘．重塑全担熬援2014-04—192014-06—09学位授予单位和日期ClassifiedIndex：UDC：Ph．D．DissertationSTUDYoNTHEM

2、ECHANISMoFIDIoPATHICPULMONARYFIBROSISANDINTERLEUKIN．31ByShiKeyunMajor：ClinicalLaboratoryScienceSupervisor：Prof．ZhengJinxuJiangsuUniversityApril，2014独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下独立完成的，除文中注明引用的内容外，本论文不包括任何其他个人或集体的研究成果。对本论文做出重要贡献的个人或集体，均在文中作了声明并表示谢意。作者签名：害1；’日期：2，礼．。b··k学位论文版权

3、授予书本学位论文作者同意学校保留该学位论文并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权江苏大学可以将本学位论文的全部内容或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于不保密吖。学位论文作者签名：桫投王导师签名：一l签字日期：年月日签字日期：年月日，川鸸la．-衫o“【训u厂6／，f2，江苏大学博士学位论文摘要目的：在特发性肺纤维化(IPF)过程中，起主要作用的TGF一13在炎症部位活性增强，使成纤维细胞大量增殖，导致严重肺纤维化，TGF一13通过Smads

4、蛋白的信号转导及调控发挥作用。而Smad-3是介导TGF—B诱导肺纤维化的关键分子，其通过调节靶基因而影响IL一6家族特别是IL一31的表达，进一步影响JAKs／STATs通路，从而引起肺纤维化。这是肺纤维化可能的机制。因此，本项目旨在利用体外培养细胞及BLM诱导小鼠肺纤维化模型，得到TGF一13卜Smad一3一IL一31一JAKs／STATs这条通路，研究这条通路是肺纤维化的可能作用机制，以对肺纤维化的靶向治疗提供一定的线索。方法：将75只小鼠按随机数字表法分为3组。其中二组为博来霉素诱导肺纤维化模型组(气管内注射BLM5mg／kg0．1mL)

5、，分别为单纯造模组(BLM组，25只)、地塞米松治疗组(DXM组，25只)、每组25只；造模后l天，地塞米松组小鼠腹腔注射DXM5mg／kg(0．1mL)，每天1次，连续28天。另1组为正常对照组(NC组，25只)。给药第3、7、14、2l、28天每组分别各处死5只小鼠。取肺组织行常规组织病理学观察；免疫组化检测肺组织中TGF一131、Smad一3含量；RT—PCR法检测IL一31、STAT—lmRNA的表达量；Westernblot测STAT一1蛋白含量；染色质免疫共沉淀(CHIP)实验检测Smad一2／3与IL一3l启动子之间的结合联系。同时

6、制得原代肺成纤维细胞，待培养3代后，抑制TGF—p表达，而对TGF—B表达的抑制，会下调Smad-3、IL-31的表达水平。对IL-31表达的降低，则会下调STAT一1的表达水平。同时查看肺成纤维细胞的形态，肺成纤维细胞的增殖特征，肺成纤维细胞的胶原合成；检测肺组织中羟基脯氨酸(HYP)含量。结果：(i)对小鼠肺初步肉眼观察和对肺组织病理学的观察，可发现由于BLM的诱导作用，BLM组小鼠的肺组织根据时问先后顺序出现由3天时的轻度肺泡炎到IL31与特发性肺纤维化信号转导机制研究14天时纤维化的动态改变。DXM组也呈现类似的病理改变过程，但其程度较B

7、LM组轻，但是，对比NC组，其程度却明显加重。NC组病理变化基本未见，没有明显的肺泡炎和纤维化改变。(2)TGF一昂1在Nc组肺组织有弱表达，在BLM组7天-14天表达达高峰，有统计学意义(p<0．01)。28天TGF一131表达明显降低。DXM组7天一14天后的TGF—B1明显低于BLM组，地塞米松能够明显降低TGF131的表达。BLM组肺组织Smad3表达增强，第7天时明显高于NC组，随后下降，但直至第28天时BLM组中Smad3的表达仍明显高于NC组。DXM组小鼠各时问点肺组织Smad3表达水平均明显低于BLM组。(3)跟NC组相比，BLM

8、组的IL一31及STAT一1mRNA从第7天丌始升高，第14天达到高峰，后逐渐下降，但到28天仍高于NC组。有明显的统计学意义(p<0．