glp-1受体激动剂对小鼠脂肪细胞功能途径的研究

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1、隶。轫大·粤临床医学硕士学位论文万方数据GLP-1受体激动剂对小鼠脂肪细胞功能途径的研究研究生姓名：互这万方数据Theresearchofglucagon-·likepeptide--1receptoragonistonthefunctionofadipose1nm1CeAThesisSubmittedtoSoutheastUniversityFortheAcademicDegreeofMasterofClinicalMedicineBYSmHuanSupervisedbySHENshah—meiSchoolofClinicalMedicin

2、eSoutheastUniversityApril2014万方数据东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：Z垫日期：型!兰璺堕旦东南大学学位论文使用授权声明东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电

3、子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布(包括以电子信息形式刊登)论文的全部内容或中、英文摘要等部分内容。论文的公布(包括以电子信息形式刊登)授权东南大学研究生院办理。研究生签名：_二砬导师签名：万方数据摘要中文摘要中文捅芰第一部分GLP．1受体激动剂通过NOS途径促进棕色脂肪细胞功能增加目的研究GLP一1受体在小鼠各组织器官中的表达情况，并明确GLP．1受体激动剂对小鼠脂肪细胞功能基因表达和分化的作用，探讨其可能的相关机制。方法使用免

4、疫组化及WesternBlot检N4,鼠各组织器官中GLP．IR的表达情况。体外培养小鼠原代棕色、白色脂肪细胞，并鉴定。诱导分化前分别加入GLP．1、L-NAME(NOS抑制剂)干预5天。细胞培养7天后对细胞进行形态学观察研究，应用荧光定量PCR、WesternBlot检测解耦连蛋白1(UCPl)、细胞死亡介导DNA碎片因子样受体Ⅱ(Cidea)、过氧化物酶增殖物激活受体y共激活因子1Q(PGCl．Q)、PR包含域16区(PRDMl6)、过氧化物酶增殖物激活受体Y(PPAR-y)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)

5、、miRNA133a、miRNA196a、miRNA133b、miRNA155的表达，采用单因素方差分析进行多组问均数比较。结果免疫组化提示GLP一1R在小鼠胰腺、肝脏、肾脏、胃、心脏、骨骼肌、白色脂肪、棕色脂肪、肺脏、小肠中有表达，而在脾脏中表达为阴性。形态学研究发现GLP．1组细胞内脂滴数目较对照组明显增加。与对照组相比，GLP．1组棕色脂肪特异性基因(UCPl、CideaPGCl一Ⅱ)、分化基因(PRDMl6、PPAR-Y)、NOS途径基因(eNOS、iNOS)的mRNA水平升高(P<0．05)，UCPl、NOS蛋白水平升高(P<0．0

6、5)。使用NOS抑制剂干预后，相关基因及蛋白水平下调。在棕色脂肪细胞中，与对照组相比，GLP．1组的微小RNA一155基因水平下降(P<0．05)。结论GLP．1受体激动剂能上调棕色脂肪细胞功能基因的表达，促进棕色脂肪前体细胞向成熟的棕色脂肪细胞分化，增强棕色脂肪组织的功能，该作用部分通过NOS途径，且高浓度的GLP一1作用更明显。关键词：胰高血糖素样肽．1；棕色脂肪；艾塞那肽；解耦连蛋白1；白色脂肪；一氧化氮合酶；胰高血糖素样肽．1受体；微小RNA．155万方数据东南大学硕士学位论文第二部分GLP．1受体激动剂通过STAT3途径促进棕色脂肪

7、细胞功能增加目的明确GLP．1受体激动剂对小鼠脂肪细胞功能基因表达和分化的作用，探讨其可能的相关机制。方法体外培养小鼠原代棕色、白色脂肪细胞。诱导分化前分别加入GLP一1、$3I．201(STAT3抑制剂)、exendin9．39(GLP．1受体拮抗剂)干预5天。细胞培养7天后对细胞进行形态学观察研究，应用荧光定量PCR、WesternBlot检测解耦连蛋白1(UCPl)、细胞死亡介导DNA碎片因子样受体Q(Cidea)、过氧化物酶增殖物激活受体1，共激活因子1Q(PGCl一Q)、PR包含域16区(PRDMl6)、过氧化物酶增殖物激活受体丫(

8、PPAR—Y)、信号转导与转录激活因子3(STAT3)的表达，采用单因素方差分析进行多组间均数比较。结果形态学研究发现GLP．1组细胞内脂滴数目较对照组明显增加。与