斑马鱼rpl5和rpl11缺陷致使dba病征的分子机制研究

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1、分类号学号M201171514学校代码10487密级硕士学位论文斑马鱼RPL5和RPL11缺陷致使DBA病征的分子机制研究学位申请人：周杨学科专业：遗传学指导教师：贾海波副教授答辩日期：2014年1月6日万方数据AThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofScienceMolecularMechanismResearchofHematopoieticFailureduetoRPL5andRPL11De

2、ficiencyinaZebrafishModelofDiamond-BlackfanAnemiaCandidate:ZhouYangMajor:GeneticsSupervisor:AssociateProf.JiaHaiboHuazhongUniversityofScience&TechnologyWuhan,Hubei430074,P.R.ChinaJan.,2014万方数据独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本

3、论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授

4、权书。本论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日万方数据华中科技大学硕士学位论文摘要红细胞再生障碍性贫血（Diamond-Blackfananemia,DBA）是一种遗传性骨髓衰竭综合征，患者主要表现为先天性红细胞发育不良以及相关的身体畸形，严重影响其生命健康。临床研究发现有多于50%的患者伴有不同的核糖体基因突变，其中有将近20%的患者表现为核糖体蛋白RPL5和RPL11异常。然而在DBA患者中，RPL5和RPL11缺陷致使造血功能异常的机制尚

5、未被完全阐明。本研究以斑马鱼为模式生物，通过显微注射吗啡琳类似物修饰的反义寡核苷酸RPL5MO（morpholino）和RPL11MO分别获取RPL5和RPL11缺陷的斑马鱼胚胎，通过全基因组RNA-Seq数据分析，O-染色，苏丹黑B-染色，血细胞相关标记基因的胚胎整体原位杂交以及血液血管相关标记基因的实时定量来检测RPL5和RPL11缺陷对血液生发的影响，并分析证实RPL5和RPL11缺失导致造血功能不足；通过相应RPL5MO和RPL11MO分别与p53MO共注射实验以及WesternBlotting检

6、测磷酸化的AKT（pAKT），磷酸化的ERK（pERK）各自含量的变化，从而探索RPL5和RPL11缺失致使造血功能不足的其分子机制。结果显示在早期胚胎中，RPL5和RPL11缺陷致使与DBA患者症状类似的血液生发障碍以及其胚胎形态的轻度畸形；造血干细胞标记基因（如c-myb、runx1等）表达明显减少；共注射p53MO会减轻非正常表型，但是RPL5和RPL11缺陷的胚胎并没有完全恢复正常；RPL5和RPL11缺陷体中pAKT和pERK微量减少。根据以上结果表明，RPL5和RPL11缺陷致使造血干细胞以及

7、血细胞系发生障碍，并且证实p53途径参与RPL5和RPL11缺陷导致的造血功能不足，RPL5和RPL11缺陷可能会通过影响PI3K/AKT通路和MAPK/ERK通路而导致HSC生发不足。本研究建立了RPL5和RPL11缺陷的斑马鱼模型，更深刻地阐释了DBA发病机制，同时也为该疾病的治疗以及检测潜在的致病基因提供了新的途径。关键词红细胞再生障碍性贫血；核糖体大亚基蛋白5；核糖体大亚基蛋白11；造血干细胞；p53途径；PI3K/AKT信号通路；MAPK/ERK信号通路I万方数据华中科技大学硕士学位论文Abst

8、ractDiamond-Blackfananemiaisarareinheritedbonemarrowfailuresyndromethatischaracterizedbypurered-cellaplasiaandassociatedphysicaldeformities.Thesyndromewilldevelopsoonafterthepatients’birthandthreatentheirhealth.Prev