麦蓝菜中vaccarin提取与生物活性及环境调控研究

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1、万方数据UniversityCode：10225RegisterCode：B14139DissertationfortheDegreeofDoctorExtractionofvaccarininVaccariasegetalisandits●●．'●．●●ltlVltro1910actlvlyandenVlrOmemalregulatlonCandidate：Supervisor：AssociateSupervisor：AcademicDegreeAppliedfor：Speciality：Dateof

2、0ralExamination：University：YuanXiaohanProf．ZhangYandong一DoctorSilvicultureOctober,2014NortheastForestry万方数据摘要

3、

4、IIIIIIIIIlUlIIIIIY2991725麦蓝菜Vaccariasegetalis(Neck)Garcke为石竹科一年生草本植物，其种子具有催乳功效，在中药中被称作王不留行。王不留行黄酮苷(vaccarin)是其种子的主要生物活性成分，我国2010版药典以vaccarin作为王

5、不留行的标识性成分。目前有关麦蓝菜中vaccarin的提取分离及其促泌乳生物活性的研究未见报道，环境因子(光照、土壤水分、矿质营养、盐碱胁迫等)对麦蓝菜生长及vaccarin积累的调控规律也不清楚，这在很大程度上影响了麦蓝菜植物资源在中草药饲料添加剂方面的深度开发及其规范化人工种植。为加强麦蓝菜药材资源的质量控制，本论文建立了麦蓝菜中vaccarin的反相高效液相色谱(RP．HPLC)检测方法，系统研究了不同提取方法对麦蓝菜中vaccarin的提取分离效果；在对奶牛乳腺上皮细胞分离纯化及鉴定的基础上，探

6、讨了vaccarin提取物对奶牛乳腺上皮细胞的催乳活性：明确了光照、土壤水分、矿质营养元素、盐碱胁迫等环境因子对麦蓝菜生长和vaccarin含量、产量变化的影响。主要研究结果如下：1．建立了分析检测麦蓝菜(植株与种子)中vaccarin的RP．HPLC方法：色谱条件：HiQSiLCl8V反相柱(250111I／1×4．6mmI．D．，5岬)，流动相为甲醇．0．6％磷酸溶液(30：70，v，v)，检测波长为332nm，流速lmL·min～，进样体积lO此，柱温：30℃。该检测方法精密度高、重现性和稳定性好

7、。2．与传统提取方法(冷浸提取、热回流提取和超声波提取)相比，微波辅助提取(MAE)麦蓝菜种子中的vaccarin可提高提取效率。甲醇浓度、温度、液固比、微波功率等单因素对vaccarin的提取效果均有影响，采用响应面法优化提取工艺，确定MAE提取vaccarin的最佳条件为：甲醇浓度：57％，温度：650C，液固比：50：lmL·g～，微波功率：400W，上述条件下vaccarin的最大提取率为0．52％，且经验证试验证实，该最大提取率与预测值相符。各单因素对vaccarin提取率的影响顺序依次为：温

8、度>液固比>微波功率>甲醇浓度。3．采用组织块培养、胰酶消化法建立了具有泌乳功能的奶牛乳腺上皮细胞，利用角蛋白18对分离纯化细胞进行鉴定；通过奶牛乳腺上皮细胞活性试验证实，vaccarin提取物能够提高奶牛乳腺上皮细胞活力及增殖能力，vaccarin提取物增乳活性的最佳浓度为5嵋·mL～；vaccarin提取物可促进奶牛乳腺上皮细胞中乳糖、B．酪蛋白和甘油三酯的分泌，增强奶牛乳腺上皮细胞的泌乳功能；vaccarin提取物能促进Stat5和B．酪蛋白的mRNA及蛋白水平的表达，表明vaccarin能够激活

9、Jak2／Stat5细胞信号通路，从而影响其下游目标分子D．酪蛋白的表达。4．通过盆栽试验和林下试验研究了光照、土壤水分、矿质营养、盐碱胁迫等环境因子对麦蓝菜生长和vaccarin积累的影响，结果如下：(1)光照强度影响麦蓝菜生物量和vaccarin含量，全光照条件有利于麦蓝菜根、茎、叶、种子生物量的积累，适度遮万方数据摘要阴有利于提高麦蓝菜各器官中的vaccarin含量；麦蓝菜根、茎、叶、种子各器官vaccarin产量在全光照条件下达最高。(2)林分郁闭度对林下种植的麦蓝菜根、茎、叶和种子生物量、va

10、ccarin含量和产量均存在显著影响：麦蓝菜根、茎、叶和种子的生物量均在全光照条件处理下最大，随郁闭度的增大各器官生物量逐渐降低；施加适当郁闭度处理，虽有利于麦蓝菜根、茎、叶和种子中vaccarin含量的提高；但麦蓝菜各器官中的vaccarin的产量仍以全光照条件处理下最高，随处理郁闭度的增加vaccarin的产量逐渐降低，表明麦蓝菜各器官生物量的积累对vaccarin产量的影响要大于vaccarin含量的影响。(3)与适宜水分(田间持水量