阿米洛利对大鼠下丘神经元上gaba,a受体的调控作用

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1、中国科学技术大学硕士学位论文阿米洛利对大鼠下丘神经元上GABA<,A>受体的调控作用姓名：刘丰申请学位级别：硕士专业：神经生物学指导教师：陈林20091101摘要阿米洛利作为一种保钾利尿剂，在临床上通常用于慢性肾衰、轻中度高血压和充血性心力衰竭等的综合治疗；除了临床治疗功效，在基础研究中，阿米洛利又可作为一种药理学工具被广泛应用，它对多种离子通道和受体均有调节作用，阿米洛利可抑制钠离子通道、质子通道、一些钠离子相关转运体(Na+．一反向转运体、N矿．Ca2+交换体)以及L型、T型电压门控钙通道的活性。此外，许多膜受体如腺苷受

2、体、肾上腺素受体、多巴胺受体、甘氨酸受体以及GABA受体，也是阿米洛利的作用靶点。配体门控离子通道受体Y．氨基丁酸A型受体(GABAARs)可介导脑中GABA的快速抑制作用，在中枢神经系统中具有多种重要的生理功能，如参与神经细胞发育、调节神经元兴奋性、传递信息等，同时GABAARs也是许多临床药物如抗癫痫类、抗焦虑类以及镇静催眠类药物的作用靶点，是神经系统疾病和神经药理学领域广泛研究的对象之一。对听觉系统而言，GABAARs介导的抑制效应也同样具有至关重要的作用，参与听觉中枢对声音信号中包含的多个信息参数的加工处理和调节控制

3、，如时程、强度、频率调谐、听觉感受野以及声音时间模式等。尽管已在重组GABAARs以及外周感觉神经元上进行过阿米洛利对GABAARs调节作用的研究，但阿米洛利对于中枢神经系统中GABAARs的影响至今仍不清楚，而下丘是中枢听觉系统声音信号处理的重要中继站，因此本实验研究采用全细胞膜片钳记录的方法，在培养的大鼠下丘神经元上检测-J'N米洛利对于GABAARs的调节作用及其可能的机制。期望通过本研究，能够明确中枢神经系统中的GABAARs是否也是阿米洛利的药理学靶点，了解在应用阿米洛利进行某些临床治疗的过程中，对听觉系统可能产生

4、的影响，以及进一步探索其在基础研究中的功能意义和价值。此次研究发现在全细胞电压钳模式下，将细胞钳制在．60mV，阿米洛利本身不诱发产生任何电流，但却能可逆的浓度依赖性的抑制30出GABA诱导的电流(尼ABA)(IC50=4544-23．5pM)；近半效抑制浓度阿米洛利使得如ABA浓度效应曲线向右平移却不影响Hill系数和GABA诱发的最大反应，说明阿米洛利是通过竞争性机制抑制尼ABA；而阿米洛利对GABA诱发反应的阻断作用不依赖于膜电压，又提示阿米洛利不是以open．channelblocker方式来发挥作用的；此外，坫AB

5、A反转电位也不受阿米洛利的影响，且该值接近氯离子平衡电位理论值，表明阿米洛利没有改变OABAAR的通道离子选择性：阿米洛利对尼ABA的这种抑制作用还受给药方式的影响，在三种给药模式中预给药模式赋予了阿米洛利最强摘要的抑制效应。综上所述，阿米洛利极有可能是通过与GABA竞争结合GABAARs上的连接位点来发挥对下丘神经元上GABAARs的抑制效应。本研究实验结果提示在血脑屏障缺损以及临床上直接将阿米洛利应用到脑脊液治疗肿瘤的情况下，不能忽视药物副反应如听源性癫痫发生的可能性。关键词：阿米洛利；细胞培养；丫．氨基丁酸A型受体：下

6、丘；全细胞膜片钳ⅡAbstractABSTRACTAmiloride，apotassiumsparingdiuretic，isclinicallyusedformanagementofrenalfailure，hypertensionandcongestiveheartfailureandexperimentallyusedasapharmacologicalagent．AmilorideexertsitseffectsthroughblockingNa+channel，矿channels．Na+．relatedtransp

7、orterssuchastheNa+．ca2+exchanger’theNa+一H+antiporterandtheT-orL—tyrpeCa+channel．Inaddition，manymembranereceptors，suchastheadenosinereceptor,theadrenergiereceptor，thedopaminereceptor,theglycinereceptorandtheGABAreceptor,areknowntargetsofamiloride．Theligand—gatedgamm

8、a-aminobutyricacidtypeAreceptors(GABAARs)areresponsibleforthefastinhibitoryactionsofGABAinthebrainandplayimportantrolesinneuronaldevelopment，neur