uplc—q—tof-ms研究橘核盐制前后成分差异

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1、UPLC—Q—TOF/MS研究橘核盐制前后成分差异［摘要］采用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)技术对橘核及其盐制品的成分进行分析，并比较盐制前后成分变化。通过主成分分析法和正交偏最小二乘判别法分析橘核盐制前后指纹图谱的差异，盐制品中圣草枸椽昔、柠檬苦素、诺米林、黄柏酮含量升高，发现潜在的化学标记物，鉴定为柠檬苦素、黄柏酮、诺米林,可作为区分生品与炮制品的指标成分。［关键词］橘核；盐制橘核；超髙效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱橘核为芸香科植物橘CitrusreticulataBlanco及其栽培变种的干燥成熟种子，性苦、平，归肝、肾经，具有理气、散结、止痛的功效

2、，用于疝气疼痛、睾丸肿痛、乳痈乳癖［1］。橘核生用长于理气散结、行气止痛，盐橘核可引药入肾，增强疗疝止痛的功效［2］。关于橘核历代有多种炮制方法，如宋代和明代有炒法,证类本草中记载“炒研为末”。《普济方》中记载：“炒令黄色，去壳，为末”。清代在炒法的基础上又增加了盐炒、炒焦、青盐拌炒、酒焙、盐酒炒等方法，其中酒制法近代已不复用。除了上述各种外，近代又出现了鉄炒和盐制2种新的炮制方法，其中盐制法似系清代的盐炒法衍变而来［3］o橘核生品及炮制品广泛用于临床，经典方剂茴香橘核丸是以盐制橘核入药［4］。超高效液相色谱与质谱联用技术（UPLC-Q-TOF/MS）集高效分离能力的色谱，高分辨、高灵敏、强定

3、性能力的质谱于一体，已成为中药成分研究的最有效的分析工具之一［5］。本试验以橘核及其盐制品为研究对象，结合Markerlynx4.1软件进行主成分分析（principalcomponentanalysis,PCA）和正交偏最小二乘判别分析（orthogonalpartialleastsquaresdiscriminantanalysis,OPLS-DA）,探讨盐制法对橘核炮制前后化学成分的影响，试图从化学成分角度阐述盐制橘核增效的科学内涵和炮制机制，为临床用药提供科学依据。1材料AcquityUPLC~SynaptMS色谱-质谱联用仪（Waters公司）；MassLynxV4.1质谱工作站（W

4、aters公司）；ELGAPURELABClassic-UVF纯水仪（英国）。甲醇（色谱纯,Fisher）；乙酸（色谱纯）；超纯水。橘核2012年11月收集于湖北，经中国医学科学院药用植物研究所黄林芳副研究员鉴定为芸香科植物橘C.reticulata及其栽培变种的干燥成熟种子，样品保存在中国医学科学院药用植物研究所标本馆。2方法与结果2.1样品前处理2.1.1盐制橘核制备橘核与盐水拌匀，室温下闷润，加热烘干。方法参考本课题组建立的一种盐制橘核的新制备方法（专利申请号为201210505335X）o2.1.2供试样品制备取橘核及其盐制品粉末（过2号筛）约2g,精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲

5、醇50mL,称定质量，加热回流提取2h,放冷，再称定质量，用甲醇补足减少的质量，摇匀，滤过，取续滤液过0.22urn微孔滤膜，即得。2.2超高效液相色谱与质谱条件2.2.1超高效液相色谱条件WatersACQUITYUPLCBEHC18色谱柱（2.1mmX100mm,1.7um）；流动相0.1%乙酸溶液（A）-甲醇（B）,梯度洗脱，0〜1min,95%〜90%A,1〜12min,95%〜0%A,12〜14min,0%〜95%A,流速0.25mL-min-1；柱温30°C；进样量2uLo2.2.2质谱条件采用电喷雾电离离子源（ESI）,负离子模式检测：扫描范围m/z50-1200,毛细管电压3.

6、0kV,锥孔电压10〜40kV,离子源温度120°C,脱溶剂温度450°C,雾化气（N2）流速60L•h-1,脱溶剂气（N2）流速600L•h-1,碰撞能量（CE）30V,质量校正质核比m/z554.2615。2.3数据分析采用MarkerLynx4.1软件对负离子模式下橘核生品及其盐制品的质谱峰进行分析，利用PCA,OPLS-DA找出化合物谱的差异，经过分析得到潜在的化学标记物。2.4橘核及其盐制品总离子流图比较橘核及其盐制品负离子模式下总离子流图见图1,橘核盐制前后化学成分变化显著，橘核盐制品与生品相比，2,3,5,6,7,9号离子峰含量明显升高；1,4,8号离子峰含量明显降低，其余变化不

7、明显。鉴别出4为1(22).7(16)-二环氧基-[20.8.0.0(7,16)]-三环-三十烷(tR5.52min,m/z443.1988),5为圣草枸椽昔(tR6.58min,m/z595.2859),6为柠檬苦素(tR7.64min,m/z469.1917),7为诺米林(tR8.19min,m/z513.2156),9为黄柏酮(tR9.26min,m/z453.1972)o2.5Marker