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《利用uplc―q―tof―mse快速研究四物汤中化学成分》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、利用UPLC-Q-TOF-MSE快速研究四物汤中化学成分［摘要］该研究利用UPLC-Q-TOF-MSE技术分析了四物汤的化学成分。通过正、负离子模式的检测，根据质谱数据以及相关文献，快速表征了43个色谱峰，鉴定了其中的25个化合物，主要包括来自白芍的8个单菇糖昔类化合物和来自川苇、当归的13个苯駄类化合物。同时，通过MarkerLynx软件进行主成分分析和偏最小二乘法分析，比较了四物汤水提液和60%乙醇提取液中的化学成分差异，为探讨四物汤补血作用的物质基础提供了依据。［关键词］四物汤；UPLC-Q-TOF-MSE；化学成分；MarkerLynx；提取方法［收稿日
2、期］2013-07-18［基金项目］国家科技支撑计划项目(2008BAI51B02)；国家自然科学基金重点项目(81130067)［通信作者］*马百平，研究员，Tel:(010)66930265,E-mail：mabaiping@sina^com四物汤起源于宋代《太平惠民和剂局方》，由熟地、当归、白芍、川苇四味药材按15：10：10：6配伍组成，具有养血调经、补血活血的功效,用于血虚所致的头晕眼花，面色萎黄，心悸气短及月经不调等［1-3］。中药复方是通过多成分、多途径、多靶点而发挥其治疗作用的，其复杂的化学组成与药效之间的关联性一直是人们关注的热点。前期研究发现
3、，四物汤采用60%乙醇提取，再经SP825大孔吸附树脂富集得到的40%〜95%乙醇洗脱部位对于辐射所致小鼠白细胞、血小板降低有较好的抑制作用；但传统上四物汤多采用的水提方法得到的相同部位却无相同作用。为了研究四物汤补血作用的物质基础，本研究通过UPLC-Q-T0F-MSE技术对水提液和60%乙醇提取液的化学成分进行了差异性分析。近年来，国内有学者对四物汤的化学成分进行了研究，采用的分析手段多为TLC,HPLC,GC-MS等［4-6］。目前，随着液质联用技术的发展和成熟，其快速、高效、简便的特点,在快速分析鉴定中药化学成分方面的明显优势，使其日渐成为中药复杂成分的
4、有效分析方法［7-8］o本实验利用超高效液相色谱和四级杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MSE)联用技术，根据各色谱峰的精确分子质量、碎片离子峰及保留时间,并结合对照品液质信息和相关文献，快速表征了43个色谱峰，鉴定了其中25个化合物；同时，利用MarkerLynx软件,比较了四物汤水提取与60%乙醇提取在化学成分上的差异，为四物汤补血作用的物质基础研究奠定了基础。1材料与方法1、1仪器与试剂WatersACQUITYTMUPLC超高效液相色谱系统(WatersCorporation,Milford,MA,USA),WatersSYNAPTMS质谱系统(Wa
5、tersCorporation,Manchester,UK)O色谱纯乙月青(Fisher,USA),色谱纯甲酸(AcrosCo.Ltd、，NJ,USA),超纯水为自制，过Millipore超纯水纯化系统(Millipore,Billerica,USA),其他试剂均为市售分析纯。四物汤各药材饮片均购自北京同仁堂(亳州)饮片有限责任公司，经天津中医药大学张丽娟教授鉴定为玄参科植物地黄RehmanniaglutinosaLibosch.的炮制加工品，伞形科植物当归Angelicasinensis(Oliv.)Diels的干燥根，)MLigusticumchuanxi
6、ongHort.的干燥根茎，毛萇科植物芍药PaeonialactifloraPall.的干燥根。芍药昔(S-010-110629).芍药内酯昔(S-011-111220),购自北京金宝在线科技有限公司，经HPLC检测，纯度均大于98%；毛蕊花糖昔(111530-201007)购自中国食品药品检定研究院，经HPLC检测，纯度为94、8%o1、2对照品溶液制备分别称取对照品芍药昔、芍药内酯昔、毛蕊花糖昔各约0、3mg,分别溶解于1mL甲醇中。各取30nL,分别稀释至500uL,均经0、22um微孔滤膜过滤，取续滤液5进行分析。1、3供试品溶液制备取熟地15g.当归1
7、0g、白芍10g、川＜6g,用8倍量的水回流提取2次，每次1、5h,趁热过滤，合并滤液，减压浓缩后进行SP825大孔吸附树脂柱色谱分离，水除杂后，收集95%乙醇洗脱部分，得四物汤水提液(SWTS)；另取等量药材，用8倍量的60%乙醇溶液回流提取2次，后经与水提液相同处理方法处理得四物汤醇提液(SWTC)o分别减压浓缩，各取2mL经0、22um微孔滤膜过滤，取续滤液5uL进样分析。1、4色谱和质谱条件色谱柱为ACQUITYHSST3C18(2、1mmX100mm,1、8um)。流动相A为0、1%甲酸水溶液，B为乙睛。洗脱梯度，0〜0、5min,5%B；0、5〜8m
8、in,5%〜45%B；8
