青春期双酚a(bpa)暴露对乳腺干祖细胞的影响

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1、万方数据论文答辩日期：万方数据温州医科大学硕士论文I嗍4㈣386吣Y291缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．2英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一4第一章：前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一7第二章：材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯102．1材料和实验动物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．102．1．1主要仪器和设备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯102．1．2主要试剂和药品⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯102．1．3实验动物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯122．2实验设计和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．122．2．1实验设计⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯122．2．2实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．13第三章：实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯233．1BPA暴露敏感浓度的筛选⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．233．2BPA暴露所致小鼠乳腺病变及乳癌风险增加的靶细胞的甄别⋯⋯243．2．1青春期双酚A暴露对原生

3、乳腺形态及生殖系统的影响⋯⋯⋯．253．2．2青春期双酚A暴露对乳腺干／祖细胞的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯263．2．3青春期双酚A暴露对乳腺管腔祖细胞亚群的影响⋯⋯⋯⋯⋯．283．2．4青春期双酚A暴露对乳腺干／祖细胞功能的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯293．2．5青春期双酚A暴露对乳腺肿瘤相关蛋白的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯．303．3C57BL／6．GFP转基因小鼠BPA暴露实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31第四章：讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36第五章：小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯39参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯40附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．44致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．45综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．46独创性说明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．55万方数据温州I仄科大学硕士论文缩略词表万方数据温州I医科大学硕士论文青春期双酚A(BPA)暴露对乳腺干／祖细胞的影响摘要研究背景：研究证实，乳腺上皮细胞的功能结构具有多层次性的特点，这与乳腺癌的不同亚型有着密切联

5、系。在日常生活中广泛应用具有雌激素效应的化工原料一双酚A(BPA)，作为一种内分泌干扰物可能是导致现代乳癌增加的主要环境因素之一。大量的动物实验己经证实围产期和胎儿期暴露于低剂量的BPA可导致成年后的乳腺发生病变，但其具体机制尚不明确。青春期是乳腺组织发育的重要时期，体内及外部环境的微小变化都会对乳腺造成重大影响。青春期BPA暴露使体内微环境发生变化从而影响乳腺细胞的增殖与补充。前期研究证实青春期是BPA敏感窗口之一，因此本实验选择青春期对小鼠进行暴露。管腔上皮细胞被认为含有不同类型的祖细胞，包括激素受体表达的祖细胞和分泌细胞。不同的乳腺上皮细胞系可结合细

6、胞表面的(CD24，Scal，CD49f)抗原通过流式分选分离。CD24训⋯Scal。CD49flow为基底层肌上皮细胞；CD24卅10wScal。CD49fhigh则富集基底干细胞。雌激素受体阳性(ER+)的管腔细胞的表型是CD24+／highScal+，而管腔CD24+／highScal‘细胞群是大部分的ER管腔祖细胞。最新研究发现，乳腺管腔祖细胞可能与基底样乳腺癌的发生有关，且乳腺管腔祖细胞中的一个亚群极有可能是细胞癌变的原发靶细胞。基于这些证据，本研究提出青春期BPA暴露所导致的小鼠乳腺病变及乳癌风险增加的靶细胞可能是乳腺管腔祖细胞中的一个亚群的科

7、学假说。研究方法：本论文的第一部分集中探究BPA的敏感浓度。即把3周龄的CD．1雌鼠连续4周暴露于不同浓度(4，40，40099／kg／day)的BPA；在7周龄时采集乳腺组织，从乳腺的形态、导管增生及小鼠体内激素水平筛选出BPA暴露的敏感浓度。第二部分集中研究青春期BPA暴露的敏感靶细胞。即把3周龄的CD．1小鼠连续4周暴露于第一部分筛选的BPA浓度，并在小鼠发育的不同阶段(7周龄，4月龄，OVX．6月龄)采集乳腺组织。一部分乳腺组织用于形态及病理学方面的研究；剩余乳腺组织制备成单细胞悬液后，用细胞表面不同的抗体(CD24，Scal，CD49f)标记结合

8、流式分选将乳腺上皮细胞的不同类群分离。然后通过体外培养对乳腺干细胞