脑缺血诱导的脑铁沉积与脑铁代谢相关蛋白及循环铁变化的关系

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1、山西医科大学硕士学位论文脑缺血诱导的脑铁沉积与脑铁代谢相关蛋白及循环铁变化的关系姓名：李艳伟申请学位级别：硕士专业：神经生物学指导教师：李琳20070501山西医科大学颈士学位论文脑缺血诱导的脑铁沉积与脑铁代谢相关蛋白及循环铁变化的关系摘要目的研究脑缺血诱导的：(1)大鼠皮层、海马铁含量及铁分布的变化；(2)大鼠皮层、海马膜铁转运蛋白l(ferroporfinl，FPl)、二价金属离子转运体1(divalentmetaltransporter-1，DMTI)、铜蓝蛋白(ceruloplasmin，CP)表达的变化：(3)大鼠皮层、海马白介素6(interleukin一6，IL·

2、6)、铁调素(hepcidin,Hep)表达的变化：(4)大鼠循环铁的变化。探讨脑缺血诱导的脑铁沉积与脑铁代谢相关蛋白及循环铁变化的关系。方法体重250—3009的雄性Wistar大鼠，随机分为脑缺血1天、3天、7天、28天和假手术对照组，每组各12只。实验组结扎大鼠双侧颈总动脉造成脑缺血，对照组仅分离出双侧颈总动脉但不结扎。模型组分别于缺血1天、3天、7天、28天取材，假手术对照组于术后第3天取材。每组6只动物经心脏采血，离心取血清，采用比色法测定大鼠血清铁含量；放射免疫法测定血清铁蛋白含量；然后经4％多聚甲醛灌注内固定后，取大鼠脑组织外固定，石蜡包埋切片，采用DAB增强的P

3、erl’s铁染色法观察脑组织铁分布情况；采用免疫组织化学染色法测定大鼠皮层及海马组织FPl、DMTI、CP、IL一6表达情况；各组另外6只动物经心脏冷盐水灌注后取新鲜脑组织，分离皮层及海马组织，低温保存，采用石墨炉原子吸收分光光谱法测定大鼠皮层及海马铁含量，采用RT—PcR测定FPlmRNA、DMTI+IREmRNA、DMT卜IREmRNA、CPmRNA和HepmRNA的表达情况。结果(1)脑缺血第1、3天组皮层及海马中铁含量与对照组无差别(P>O．05)：缺血第7天皮层及海马铁含量均高于对照组(P

4、血第l、3、7天组皮层、海马神经元中未见铁染色颗粒：而缺血28天组皮层II—V层及海马各区的神经元中均出现大量铁沉积颗粒。(3)大鼠皮层和海马均表达FPImRNA。在缺血第1、3、7、28天组皮层FPlmRNA的表达均低于假手术组(P<0．01)，且随缺血时间的延长逐渐降低：海马FPlmRNA在缺血第l天表达最低(尸<0．01)，随缺血时间的延长逐渐升高，但在缺血1、3、7天组均低于假手术组(JPO．05)。在脑组织脉络丛细胞、室管膜细胞及皮层的锥体神经元中均大量表达FPl，海马锥体细胞和颗粒细胞亦有表达。皮层及海马FPl表达在缺血1、

5、3天组与对照组无差别(尸>O．05)；缺血7天组表达减少(PO．05)；在缺血7天时表达增加(PO．05)外，其余各组二者表达均高于假手术组(

6、PO．05)外，其余各组表达均高于假手术组(PO

7、．05)；缺血3天组皮层和海马CP表达低于假手术组(P．O．05)，恢复至正常水平。(7)大鼠皮层及海马表达HepmRNA很少，远低于肝脏的表达(尸>O．05)。脑缺血各组H