荣昌猪、长白猪免疫相关基因fkbp5的克隆、表达以及其表达蛋白质活性分析

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1、万方数据SichuanAgriculturalUniversityMasterDegreeDissertationCLON烈GANDEXPRESSIONANDANALYSISOFEXPRESSIONPROTEINACTIVITY0FRONGCHANGPIGANDLANDRANCE’SIM卫小烈ERELATEDGENEFKBP5Ph．M．Candiate：XiLoNGSupervisor：Prof．Xue—WeiLIProf．Jiu-GangZHAOMajor：AnimalBreedingandGeneticsSpecialty：PigBreedingandGene

2、ticsJune，2014万方数据论文指导小组成员lIMIIIIIIIIfl!lllUrIIIIII!!lJO12122陈磊(副研究员)重庆市畜牧科学院养猪研究所蓝静(副研究员)重庆市畜牧科学院养猪研究所本论文由国家自然科学基金项目：FKBP5钙调磷酸酶活性介导的Ca2+离子信号通路在猪T细胞增殖活化过程中的功能研究(项目编号：31201770)资助本论文在农业部养猪科学重点实验室完成兀，戏万方数据论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体己

3、经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：瘤醒p，够6月g曰关于论文使用授权的声明本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：荪娶导师签名：搿印羁侔多月宕日沙{牛年毛其lB万方数据摘要本

4、实验用RACE、qPCR、W-esternNot、基因克隆、测序、表达蛋白等方法，克隆了荣昌猪、长白猪FKBP5基因cDN．A全长、构建了FKB．P5组织表达谱、表达纯化了FKBP5蛋白，得到了如下结果：1、利用3’，5’末端快速扩增法(RapidAmplificationofcDNAEndstechniques，RACE)从荣昌猪和长白猪胸腺组织中首次克隆出荣昌猪、长白猪FKBP5基因。荣昌猪FKBP5基因eDNA全长为4119bp，CDS区长为1374bp，编码458个氨基酸的多肽，在5’端和3’端分别含有212bp和2533bp的非编码区；长自猪磁BP．，基

5、因cDNA全长为4164bp，CDS区长为1374UP，编码458个氨基酸的多肽，在5’端和3’端分别含有255bp和2535bp的非编码区。2、运用qPCR和WesternBlot技术检测了该基因在荣昌猪和长白猪不同组织中的mRNA和蛋白表达谱，并且分析了FKBP5mRNA在荣昌猪和长自猪各组织中的表达差异。研究结果表明，在所检测的组织中，心、肝、脾、肺、。肾、胃、脑、肌肉、性腺、胸腺中均有豚8P．5基因表达，其中，在先天免疫相关组织胸腺中表达丰度最高，且显著性高于其它组织，并且FKBP5基因在长自猪胸腺组织中的表达量显著性高于荣昌猪胸腺组织表达量。3、分别将荣

6、昌猪、长自猪CDS区克隆进原核表达载体pET-28a，构建好的表达载体转化Rosetta蛋白表达菌，分离纯化出具有活性的荣昌猪、长白猪FKBP5蛋白。该研究结果为进一步研究FKBP5基因对于T淋巴细胞增殖的功能研究奠定了基础，对深入研究猪抗病育种分子机理具有重要意义。关键词：荣昌猪，长白猪，FKBP5克隆，表达谱，蛋白表达纯化万方数据AbstractUsingRACE，qPCR，WesternBlot，geneclone，sequencing，proteinexpression，．thisstudycoinedthefull—lengthFKBP5eDNAofRo

7、ngChangpigandlandrance,detectedtheFKBP5expressionprofileinseveraltissuesofRongchangpigandlandrance，separatedandpurifiedFK_BP5proteinofRongchangpigandlandrance．Andtheresultsareasfolloes：1，wecoinedthefull-lengthFKBP5eDNAofRongChangpigandlandrancefrom也如thymusbyRACEtechnique．Thefull—lengt

8、hofRo