狂犬病病毒结构基因的克隆及犬瘟热病毒n蛋白基因与egfp基因重组质粒的构建

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1、万方数据独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得新疆农业大学或其他教育单位的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的贡任何献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：亘躺时间：触年6月)。日关于学位论文使用授权的说明本人完全了解新疆农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：新疆农业大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电

2、子文档，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，允许论文被查阅和借阅。本人授权新疆农业大学将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：复捅刷醛轹莉也时间：姚年石月72El时间：五渺年∥月肋日万方数据I吣㈣眦眦帆嘲㈣llII叫Y26979——53本文是国家自然科学基金项目“犬瘟热病毒N基因一犬细小病毒VP2基因构建重组狂犬病病毒的研究"的部分研究成果(项目编号：31360623)课题主持人：简子健教

3、授(新疆农业大学)万方数据狂犬病病毒结构基因的克隆及犬瘟热病毒N蛋白基因与eGFP基因重组质粒的构建摘要本研究从BHK-21细胞培养的狂犬病病毒SRV9株病毒液中提取病毒总RNA，通过反转录PCR(ReversetranscriptPCR，RT-PCR)技术进行狂犬病病毒结构基因的扩增，得到1352bp的N基因(核蛋白基因，nucleoproteingene，N)，893bp的P基因(磷酸化蛋白基因，phosphoproteingene，P)，608bp的M基因(基质基因，matrixproteingene

4、，岣，1574bp的G基因(糖蛋白基因，glycoproteingene，G)，3372bp的L1基因(大转录蛋白l，largeproteingenel，L1)以及3012bpL2基因(大转录蛋白2，largeproteingene2，L2)，并将其分别连接于pMDl9-T载体，进行测序并与SADB19株比对，实验结果如下：N基因、P基因、M基因、G基因、L1基因以及L2基因的核苷酸序列与SADB19株的核苷酸同源性分别为100％、99．66％、99．67％、99．04％、100％及98．70％，氨基酸序列

5、的同源性分别为100％、98．99％、100％、98．65％、100％以及99．91％。应用重组PCR技术进行基因片段的拼接，构建增强型绿色荧光蛋白eGFP基因与犬瘟热病毒N蛋白基因的重组质粒(pT--eGFP．CDVN)、狂犬病病毒融合基因P．M的重组质粒(pT-PM)以及融合基因L1．L2的重组质粒(pT-L)。实验结果如下：通过重组PCR技术获得的融合基因eGFP．CDVN、P—M和L的片段分别为2292bp、1501bp和6384bp，重叠区域完全重合，未发生突变及错位。本研究成功构建融合基因片段，

6、为狂犬病病毒SRV9株全长eDNA的构建以及RV减毒重组基因疫苗的研究探索条件。关键词：狂犬病病毒SRV9：结构基因：犬瘟热N蛋白基因；eGFP基因；重组PCR万方数据CloningStructuralGenesofRabiesVirusandConstructiononRecombinantPlasmidwithGeneNinCanineDistemperVirusandeGFPGeneAbstractThetotdRNAWaSextractedfromculturedrabiesvirusSRV9byB

7、HK-21cell．TheNgene，Pgene，MGene，Ggene,LIandL2genefromthetotalRNAwereamplifiedbyreversePCR(RT-PCR)andligatedintopMDl9·Tvectors．Theamplifiedfragmentswere1352bp(nucleoproteingene，Ngene)，893bp(phosphoproteingene，Pgene)，608bp(matrixproteingene，Mgene)，1574bp(glyc

8、oproteingene,Ggene)，3372bp(1argeproteingenel，L1gene)and3012bp(1argeproteingene2，L2gene)，respectively．TheresultsofsequencingandcomparedwithSADB19sequencewereshownthenucleotidehomologyofNgene，Pgene，Mgene，Ggene，