重组hil-24联合5-fu对乳腺癌细胞抑制及诱导凋亡研究

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1、遵义医学院硕士学位论文重组Hil--24联合5--FU对乳腺癌细胞抑制及诱导凋亡研究姓名：冉健申请学位级别：硕士专业：免疫学指导教师：孙万邦201205遵义医学院硕士学位论文中文摘要重组人IL．24联合5一FU对乳腺癌细胞抑制及诱导凋亡研究摘要目的：以重组人白细胞介素．24(recombinanthumaninterleukin．24，rhlL．24)联合5一氟脲嘧啶(5．Fluorouracil，5-FU)作用于乳腺癌MDA．MB．157细胞，研究白细胞介素．24(interleukin，IL．24)单一用药和联合5．FU用药对乳腺癌细胞的抑制效应，检测肿瘤细胞凋亡，探讨联合用药抗肿瘤机制

2、，为rhIL．24联合5．FU的体内实验和临床应用提供理论指导。方法：(1)将1009l浓度为104个细胞／ml的MDA．MB．157细胞和浓度为2x104个细胞／ml的WI．38细胞分别加入96孔板，前者在37*C、无C02，饱和湿度；后者在37℃、5％C02，饱和湿度条件下，培养24小时，弃上清，分别加入rhIL．24浓度分别为80ng／ml：100ng／ml；120ng／ml；150ng／ml；200ng／ml，5一Fu浓度分别为：599／ml；1099／ml：2599／ml；5099／ml；75pg／ml，在同样条件下继续培养24小时，48小时，72小时；以CCK．8法检测细胞增殖，

3、绘制生长曲线，计算生长抑制率。(2)将1009l浓度为104个细胞／ml的MDA．MB．157细胞和浓度为2×104个细胞／ml的WI．38细胞分别加入96孔板，前者在37℃、无C02，饱和湿度条件下，后者在37。C、5％C02、饱和湿度条件下，培养24小时，弃上清，加入120ng／ml的rhlL一24联合1099／ml的5．Fu，分别在24小时，48小时，72小时，以CCK．8法检测细胞增殖，绘制生长曲线，计算生长抑制率。(3)将1009l浓度为104个细胞／ml的MDA．MB．157细胞和浓度为2x104个细胞／ml的M．38细胞分别加入6孔板，前者在37℃、无C02、饱和湿度条件下，后

4、者在37。C，5％C02、饱和湿度条件下，培养24小时，弃上清，分别加入120ng／ml的rhIL一24，1099／ml的5-Fu及120ng／ml的rhlL一24联合10pg／ml的5．FU各三个实验组，培养24小时，收集细胞，流式细胞仪检测细胞凋亡。(4)将收集的细胞同时AnnexinV-FITC染色，在荧光显微镜下观察MDA．MB．157细胞和WI．38细胞的凋亡形态学变化。结果：(1)药物抑制浓度：rhIL．24对MDA．MB．157细胞的最适抑制浓度是120ng／ml，5一Fu对MDA—MB-157细胞的最适浓度是101ag／ml；rhlL．24对WI．38细胞无抑制作’遵义医学院

5、硕士学位论文中文摘要用，5．Fu对WI．38细胞的最适浓度是1099／ml。(2)联合抑制作用：联合组作用MDA．MB．157细胞在24小时，48小时，72小时的抑制率分别是：28．2％，36．5％，44．7％。联合组作用WI．38细胞在24小时，48小时，72小时的抑制率分别是：5．4％，25％，68．7％。(3)细胞捌亡率：MDA．MB．157细胞，rhIL．24组细胞凋亡率14．9％，5．Fu组细胞凋亡率20．2％，联合组细胞凋亡率26．1％：WI．38细胞：rhIL．24组细胞凋亡率6．8％，5．Fu组细胞凋亡率28．1％，联合组细胞凋亡率24．1％。(4)细胞凋亡形态观察：rhIL

6、．24或(和)5．FU作用MDA．MB．157细胞24小时，联合组可见胞体固缩和凋亡小体细胞。结论：(1)rhIL．24对MDA．MB．157细胞具有抑制作用，其最适抑制浓度为120ng／ml，rhIL．24对WI．38细胞无明显抑制作用。(2)5-Fu对MDA．MB．157细胞和WI．38细胞的抑制作用与浓度呈正相关，存在时间依赖性，表明5-Fu对正常细胞也有细胞毒作用。(3)rhIL．24联合5-Fu抑制细胞生长作用比单一药抑制作用更强，表明联合用药具有协同作用。(4)单用rhIL．24或rhIL．24联合5-Fu通过诱导细胞凋亡发挥抗肿瘤效应。关键词：白细胞介素．245．氟脲嘧啶乳腺癌

7、细胞抑制作用遵义医学院硕士学位论文英文摘要ExplorationofthemechanismofgrowthinhibitionandapoptosisinductionbycombinedtherapywithrhlL-24and5-FUinbreastcancercellsAbstratObjectives：Tocomparetheinhibitoryeffectsofthecombinedtherapy