骨髓基质细胞复合plgaβ-tcp修复犬下颌骨节段缺损的实验研究

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1、遵义医学院硕士学位论文骨髓基质细胞复合PLGA/β--TCP修复犬下颌骨节段缺损的实验研究姓名：李匡政申请学位级别：硕士专业：口腔临床医学指导教师：董平201205遵义医学院硕士学位论文BMSCs复合PLOA／B-TCP修复犬下颌骨节段缺损的实验研究骨髓基质细胞复合PLGA／B-TCP修复犬下颌骨节段缺损的实验研究中文摘要目的：本研究以骨髓基质细胞为种子细胞，制备聚乳酸乙酸交酯／6．磷酸三钙(PLGA／p．TCP)多孔复合材料，并以其为支架，评价BMSCs／PLGA／13．TCP修复下颌骨缺损的潜能，为将来运用于

2、临床下颌骨缺损修复提供新的途径。方法：1、PLGA按L．LA：GA=70：30(摩尔比)聚合，红外光谱、磁谱共振氢谱分析后复合p．TCP(PLGA：13-TCP=6：4，质量比)，以NaCl为致孔剂的溶液浇铸／粒子沥滤技术制备PLGA／IB．TCP多孔复合支架，比重法测定孔隙率，电镜下观察支架材料表面和孔隙内BMSCs附着情况。2、犬股骨骨髓穿刺，用密度梯度离心法分离、获取BMSCs，体外培养增殖，成骨诱导剂诱导分化后，进行成骨细胞表型鉴定。取成年比格犬6只，随机分成实验组和对照组，各3只。以成骨诱导后的BMSC

3、s为种子细胞，PLGA／13．TCP为支架，建立犬单侧下颌骨3cm节段缺损模型，实验组植入BMSCs／PLGA／p．TCP复合体；对照组植入PLG～B—TCP；在术后4周、12周、24周处死动物，分别进行影像学、大体标本、组织学观察骨缺损区修复效果。结果：1、PLGA／13-TCP多孔复合支架的孔隙率约为85％，孔径在150pm'----300p,m之间：SEM显示BMSCs可在该支架内生长繁殖。2、用密度梯度梯度离心法结合贴壁法成功分离并获得BMSCs，体外培养并成骨诱导后，碱性磷酸酶染色、钙结节茜素红染色、B

4、GP细胞免疫化学和免疫荧光均阳性。3、犬下颌骨节段缺损模型：①术后4周，CT扫描实验组有新生骨组织形成，对照组无成骨影像；组织学观察实验组见支架材料均有不同程度的降解，可见大量成骨细胞、破骨细胞及软骨细胞，对照组见异物巨细胞和炎性细胞浸润；OPN免疫组化实验组阳性表达，对照组无表达。②术后12周，CT扫描实验组充满密质骨影像，对照组密度较4周时减低；HE染色，实验组见骨岛形成、周围成骨细胞增生活跃、支架材料进一步降解，对照组有大量纤维结缔组织形成、支架降解不如实验组明显；4遵义医学院硕士学位论文BMSCs复合PL

5、GA／B-TCP修复犬下颌骨节段缺损的实验研究OPN免疫组化实验组更多细胞阳性表达，对照组无表达；③术后24周，CT扫描实验组缺损区中央有松质骨形成、周围骨皮质包绕，对照组为软组织影像；HE染色，实验组形成较成熟骨组织、骨髓腔隙，支架材料完全降解，对照组缺损部分呈纤维性愈合。结论：1、PLGA／p．TCP多孔复合支架是一种良好的骨组织工程支架材料。2、BMSCs可以作为骨组织工程的种子细胞。3、经成骨诱导的BMSCs复合PLGA／p．TCP支架的组织工程化骨能修复犬下颌骨节段缺损。关键词：PLGA／p．TCP；溶

6、液浇铸／粒子沥滤；骨髓基质细胞；下颌骨节段缺损；诱导分化；ExperimentalstudyinrepairofcaninesegmentalmandibulardefectsusingbonemarrowstromalcellsandPLGA／IB．TCPAbstractPurpose：Inthisstudy,weseededtheBMSCsintoPLGA／13．TCPscaffoldtoconstructtissueengineeringartificialboneinvivo，toexplorethepo

7、tentialvalueonrepairingthemandibularsegmentaldefectincanine．Methods：1．PLGAwaspolymerizedwithLAandGA，accordingtoLA／GA=70／30．m01eratio-Then，infraredspectralanalysis，nuclearmagneticresonancespectrumanalysis，gelpermeationchromatography．MixedthePLGA，[3-TCPpowderas

8、certainproportion[PLGA／fl-TCP=6／4，qualityratio]．UsingNaClasporogenmaterial．massiveporousPLGA／p-TCPScaffoldswasfabricatedbyamethodofsolutioncasting／porogenleaching．Thensoakedscaffoldsindei