朊病毒病中ampk-ulk1自噬调节通路的研究

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1、分类号陴编号ft硝蚓山心L@江薛大擎硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目题痘重痘主△丛里K：堕坠K曼自咝翊堇通路的班窒学科专业!逝瘗捡验趁堑堂作者姓名范堂主指导教师召匹启挂塾撞答辩日期至Q】垒生鱼旦]2目分类号窿生UDCg{6密级一公盈一编号l姻知l堡立z2硕士学位论文朊病毒病中AMPK-ULKl自噬调节通路的研究ToINVASTIGATETHECONTRIBUTIoNToAUTOPHAGYoFAMPK—ULKlPATHⅥ，AYINPRIONDISEASE作者姓名：范学宇导师：邵启祥教授指导老师：董小平研究员田婵副研究员申请学位：硕士专业

2、名称：监瘗捡验趁逝堂学位授予单位：江苏大学论文提交日期：2014年4月28日论文答辩日期：2014年6月12曰学位授予日期：2014年6月f‘日独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己注明引用的内容以外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果，也不包含为获得江苏大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：花澎聋J口，矽年D多月见日学位论文版权使用授权书江苏大学

3、、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致，允许论文被查阅和借阅，同时授权中国科学技术信息研究所将本论文编入《中国学位论文全文数据库》并向社会提供查询，授权中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本论文编入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》并向社会提供查询。论文的公布(包括刊登)授权江苏大学研究生院办理。本学位论文属于不保密学位论文作者签名：锄⋯一研房砰珈缈年汐易月仡曰吱口膨年彩月他日江苏大学硕士学位论文摘要朊病

4、毒病，是一类可感染包括人类在内多种哺乳动物的致死性神经退行性疾病，又称可传播性海绵状脑病(Transmissiblespongiformencephalopathies，TSEs)。具有感染性和复制能力的异常朊蛋白(PrP&)的沉积被认为是朊病毒病的主要致病原因，因此蛋白降解系统的异常改变在朊病毒病的发生、发展过程中就显得尤为重要。自噬是细胞吞噬自体胞质、衰老细胞器、错误折叠蛋白以及病原体，然后将其降解成氨基酸重新再利用的生物过程，整个过程包括起始、延伸、成熟和降解几个阶段。自噬主要受哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammaliantargetofrapamycin，

5、mTOR)依赖性通路和非mTOR依赖性通路以及一些蛋白激酶的调节。单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMP—activatedproteinkinase，AMPK)、Unc样激酶1(Unc．1ikekinase1，ULKl)是调节自噬的重要激酶，可以诱导自噬的发生。有研究表明，ULKl的第555位氨基酸一丝氨酸555(Ser555)是正向调节自噬的一个重要磷酸化位点，而抑制性位点Ser757受mTOR的调控，负调节自噬。本课题研究了朊病毒感染后AMPK—ULKl信号通路调节自噬的情况。本研究主要从体内和体外两方面展开研究。体内研究发现：羊瘙痒因子263K感染的仓鼠脑组织

6、中AMPKal／2和172位苏氨酸磷酸化的AMPKot(p-AMPK(Thrl72))、ULKl和555位丝氨酸磷酸化的ULKl(p—ULKl(Ser555))的蛋白表达水平相比正常仓鼠脑组织有显著的升高，而757位丝氨酸磷酸化的ULKl(p—ULKl(Ser757))的表达水平却有明显下降。免疫组织化学实验结果显示：263K感染的仓鼠脑组织朊病毒病中AMPK．ULKl自噬调节通路的研究切片中小脑、皮质、脑干部位表达AMPKotl／2、P．AMPK(Thrl72)、ULKl和p-ULKl(Ser555)阳性信号的细胞都有明显的增加；而其小脑部位表达p-ULKl(

7、Ser757)阳性信号的细胞有明显的减少，皮质和脑干部位几乎检测不到阳性细胞。263K感染的仓鼠脑组织匀浆中AMPK上游肝激酶B1(1iver-kinaseB1，LKBl)和钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(calcium／calmodulindependentproteinkinaseII，CAMKII)的蛋白水平出现显著的降低。并且AMPK、ULKl、p-AMPK、p-ULKl和AMPK上游调节激酶在263K感染后的仓鼠脑组织中表达水平的变化都呈现出明显的时间依赖性。体外研究主要是利用羊瘙痒因子chandler株感染的SMB．S15细胞和经戊聚糖硫酸酯治疗后康复的

8、SMB．PS细胞为研究对