foxo3a-chk3xrcc1在纳米二氧化钛诱导l02细胞dna损伤修复中的作用研究

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2、本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和

3、致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的巧究成果，谐导教师对此进行了审定。本论文由专人独立撰写，文责自负。研究生签名．．乃兹导师签章：弓秒蒙≯7妒年弓月巧日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5英文缩写⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9研究论文FOX03a-CmQ腻C1在纳米二氧化钛诱导L02细胞DNA损伤修复中的作用研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯lO日盯吞⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯lO材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26{寸论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38综述多功能转录因子FOX03a生物学研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．42致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯52个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯53中文摘要FOX03a．ChK2／XRCCl在纳米二氧化钛诱导L02细胞DNA损伤修复中的作用研究摘要目的：纳米二氧化钛(nanoparticletitaniumdioxide，Nano．Ti02)作为一种新型光催化剂、抗紫外线剂和光电效应剂而被广泛用在化妆品、抗菌防霉、环境污染治理、抗老化和汽车表面漆等领域。近来研究表明Nano．Ti02暴露于小鼠，以其小粒径可穿透细胞膜进入细胞内诱发炎症反应进而导致DNA受损，Nano．Ti02甚至可以穿透核膜进入细胞核，直接与遗传物质DNA结合形成加合物，从而大大增加接触者患肿

6、瘤的风险。不同晶型和表面特征的Nano—Ti02对多种体外培养的细胞均可造成不同程度的DNA损伤(包括DNA断裂、微核形成、DNA加合物形成等)，这不仅和纳米颗粒本身的物理特性有关，还和纳米材料所致的遗传毒作用机制密切相关。虽然目前的研究对Nano．Ti02所引起的DNA损伤特点和类型进行了较为细致的研究，但是其中所涉及的分子机制至今尚未阐明，因此对于Nano．Ti02诱导DNA损伤的可能机制成为人们关注的焦点。方法：1细胞培养及细胞模型建立人胚肝细胞株L02(中国武汉典型培养物保藏中心)于含10％热灭活小牛血清的DMEM培养基中，37℃，

7、5％C02饱和湿度下培养。选对数生长期的细胞，用粒径为25nm的Nano．Ti02染毒处理24小时，剂量为O．1I_tg／mL、lI．tg／mL、10l-tg／mL：以DMEM为阴性对照。2细胞形态观察通过倒置显微镜观察Nano．Ti02染毒后L02细胞形态的改变。3流式细胞术检测荧光探针标记的ROS水平以2，7．二氢二氯荧光黄双乙酸钠(DCFH-DA)作为荧光探针，采用流式细胞检测技术检测不同剂量的Nano．Ti02处理L02细胞6h、24h后细胞内活性氧(ROS)含量。4彗星试验检测DNA损伤应用彗星试验检测L02细胞DNA损伤程度。中

8、文摘要5宿主细胞恢复活性实验(HCR)检测细胞修复能力氯化镉(21．tmol／L)常温损伤pGL3．Control质粒2小时，乙醇沉降法回收受损质粒，TE溶解沉淀，质粒浓度定容为1“∥pl。瞬时转染受损质粒和pRL—TK质粒，以不同浓度的Nano-Ti02处理L02细胞24小时后，采用双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测样品中双荧光素酶的表达情况，以荧光强度／1．tg蛋白含量分别表示虫荧光素酶和海肾荧光素酶的表达量，以虫荧光素酶和海肾荧光素酶的比值来反应DNA修复能力。6荧光定量PCR检测FOX03a、ChK2、GADD45a及XRCC1基因m

9、RNA水平纳米二氧化钛处理细胞后，Trizol提取细胞总RNA，TIANScripteDNA第一链合成试剂盒反转录生成第一链cDNA，实时荧光定量PCR检测FOX03a-Cl此／