抵抗素对nafld肝纤维化的影响及可能机制的体内外研究

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1、重庆医科大学硕士学位论文抵抗素对NAFLD肝纤维化的影响及可能机制的体内外研究姓名：杨云鹏申请学位级别：硕士专业：病理学与病理生理学指导教师：管小琴201205重庆医科大学硕士研究生学位论文抵抗素对NAFLD肝纤维化的影响及可能机制的体内外研究摘要目的探讨抵抗素对非酒精性脂肪肝病(non—alcoholicf狮liverdiseaseNAFLD)肝纤维化的影响及可能的体内外作用机制。方法应用高脂饲料喂养30只wistaur大鼠建立NAFLD肝纤维化体内模型，随机分成对照组和模型组，各15只，分别喂以普通饲料和高脂饲料，分别在15、18、21周各处死10只(对照组5只，模

2、型组5只)。苏木素一伊红染色(HE染色)、胶原纤维染色(VG染色)观察肝组织纤维化的情况，电镜观察HSC(肝星状细胞)的活化以及肝组织纤维化的情况；测定大鼠血清纤维化指标III型前胶原(PCIII)、透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(CⅣ)、层粘连蛋白(LN)水平，采用半定量ImPCR及Westemblot法检测大鼠肝组织抵抗素表达，观察抵抗素和肝纤维化之间的变化趋势。选用重组抵抗素作用于HSC．T6建立NAFLD肝纤维化体外模型。用含10％胎牛血清的RPMI．1640培养基培养HSC．T6，细胞长满培养瓶75％后传代，待贴壁后分4组：A组(1640培养液)；B，C，D组分别

3、于1640培养液中加入不同浓度抵抗素25u∥L，50u∥L，和100u∥L，各组细胞分别培养72小时后，检测细胞上清液中III型前胶原(PCIII)、透明质’重庆医科大学硕士研究生学位论文酸(HA)、Ⅳ型胶原(CⅣ)、层粘连蛋白(LN)水平；采用半定量ImPCR法检测HSC．T6中转化生长因子B．1(TGF．B1)lnIⅢA及肿瘤坏死因子Q(TNF．Q)1nIWA表达水平。分析抵抗素对HSC的作用机制。结果随着高脂饲料喂养大鼠时间的延长，大鼠肝组织出现纤维化变化，大鼠血清中肝纤维化指标III型前胶原(PCIII)、透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(CⅣ)、层粘连蛋白(LN)水

4、平逐渐升高，表明纤维化程度逐渐加重；大鼠肝组织内HSC活化，抵抗素表达逐渐增加。随着抵抗素浓度的增加，HSC．T6上清中纤维化指标III型前胶原(PCIII)、透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(CⅣ)、层粘连蛋白(LN)水平逐渐升高，表明纤维化程度逐渐加重；细胞中TGF．B1mIⅢA及TNF．QmIⅢA表达增加。与对照组比较，各指标差异均有显著性(p值<0．05或0．01)。结论动物模型中，抵抗素的表达增加，大鼠肝组织HSC活化，肝纤维化程度加重，大鼠血清中肝纤维化指标水平逐渐升高，但对抵抗素与纤维化的因果关系不甚清楚，所以建立体外细胞模型加以研究，研究表明抵抗素促使肝纤维化

5、指标水平逐渐升高，TNF．Q、TGF．B1mRNA表达增加，提示抵抗素可能通过作用于HSC，使其产生TNF．Q、TGF一91等炎症因子，诱导NAFLD肝纤维的发生发展。关键词：抵抗素；非酒精性脂肪肝；纤维化；肿瘤坏死因子Q重庆医科大学硕士研究生学位论文EFFECTSoFRESISTINoNHEPATICFIBRoSISPOSSIBLEMECHANISMINNON．ALCoHoLICFATTYLIVERDISEASEININVTRoANDINVIVoObjectiVeABSTRACTToinVestigatemeresistancefactorsfornonalcohol

6、ic脚liVerdisease(non—alcoh01icf-a啊liVerdisease．NAFLD)hepaticfibrosisinratsandpossibleVivoandinVi仃omechallisms．MethOdsTheestablishmentoftheNAFLD1iverfibrosisinvivomodeltoapplicationofllighf．atdiet，3OwistarratswererandomlydiVidedintocontrol伊oupandmodel伊oup，15werefedanomlaldietandhi咖fatdiet，

7、respectiVely，weresacrificed1Oat15，18，21weeks(contr01伊oup，modelgroup5)．Hematoxylin-eosinstainillg(HEstaining)andcollagenfiberstainillg(VGstailling)obserVedinliVertissuefibrosis，meelec仃onmicroscopetheHSC(hepaticstellatecells)ac廿Vationand1iVerfibrosis；Detenninationofserumt11