抗菌肽对基因fasfasl的调节作用

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1、ClassifiedIndex：Q!箜：呈UDC：580SecrecyRate：PubiziedUniversityCode：10082HebeiUniversityofScienceandTechnologyDissertationfortheMasterDegreeTheRegulationofAntimicrobialPeptidesonFQSfFQsLGeneCandidate：Supervisor：AssociateSupervisor：AcademicDegreeApppfiedfor：Speci

2、ality：Employer：DateoforalExamination：SunHongminProf．1iDongjieVoice．Prof．SunGuojieMasterofScienceBotanySchoolofBiologicalScienceandEngineeringMay,2014洲撇大学学位论姗悔明f煳必本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任

3、何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：狐№矽f乒年夕月够日指导教师签名：砌修夕月妒河北科技大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权河北科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。口保密，在一年解密后适用本授权书。本学位论文属于／。嗨保密。

4、(请在以上方框内打“√”)学位论文作者签名：协凇艮指导劢r垆彬日例彤年痿日名∥J鹳哳秘月刻岁摘要摘要抗菌肽(APMs)是一种新型的抗生素药物，属于小分子多肽，具有广谱抗菌活性，对真菌，细菌，病毒及癌细胞均有很强的杀伤作用，而且不会引起病原菌的耐药性。可以加快伤口的愈合，提高集体的免疫力，可以作为免疫调节因子，维持机体内环境的稳定与平衡。本实验需要检测的目标基因是Fas／FasL，Fas位于细胞膜表面的跨膜受体，其配体FasL与其结合可以启动细胞凋亡信号的传导，启动细胞凋亡程序。据有关研究发现，Fas／FasL

5、凋亡途径与肿瘤免疫逃逸有关，Fas依赖性细胞凋亡途径是由Fas受体与它的配体FasL的同源性相互作用调节的。正常情况下，活化的T淋巴细胞以外的分泌体产生的FasL与肿瘤细胞表面的死亡受体Fas结合，可以启动肿瘤细胞的程序性死亡。除此之外，Fas／FasL基因还可以充当机体免疫调节因子，当机体受到外来信号刺激时，表达FasL分子的细胞就会与携带Fas抗原的细胞结合，辅助免疫细胞维持机体免疫稳态。本文着重介绍了用不同浓度的抗菌肽处理体外培养的巨噬细胞RAW，以及人工喂养小鼠，然后在细胞水平及动物水平检测目标基因F

6、as／FasL表达量的变化，来验证抗菌肽对免疫调节的影响。涉及到的实验内容如下：首先进行MTT细胞毒性实验，用不同浓度的抗菌肽处理巨噬细胞RAW以及成正常体细胞纤维细胞3T3，在不同的时间点检测细胞活力值的变化情况，来说明抗菌肽对免疫细胞的影响，然后利用试剂盒提取药物处理过的两种细胞的RNA，经过逆转录，PCR扩增，及实时定量PCR，检测细胞内部Fas／FasL基因各自的变化趋势。其次，提取经过抗菌肽处理过的细胞的总蛋白，对其进行Westernblot蛋白水平半定量检测，观察由Fas／FasL编码翻译表达的蛋

7、白量的变化，来进一步验证抗菌肽对基因Fas／Fa也的影响。最后，利用流式细胞仪检测从动物组织提取出来的免疫细胞，利用带有不同荧光物质的Fas，FasL抗体与目标蛋白的结合，通过检测荧光强度来说明目标蛋白表达量的变化趋势。基因Fas／FasL表达量及其编码蛋白表达量的变化，来证明抗菌肽对基因Fas／FasL的免疫调节作用。流式细胞检测相对于Westernblot更加直观，且更加准确。两者都是用来验证蛋白水平的目标基因表达量变化。经过以上实验验证，细胞水平和蛋白水平的得到的实验结果大体是一致的，抗菌肽对基因Fas

8、L有上调作用，能够加快免疫细胞的成熟，说明抗菌肽的免疫调节对机体内环境的稳定是有一定辅助作用的。关键字抗菌肽；Fas／FasL；基因；细胞；蛋白；免疫调节河北科技大学硕士学位论文IIAbstractAntimicrobialpeptides(AMPs)arenewantibiotic，whicharesmallpeptidewithbroad—spectrumantimicrobialactivit