优化人α-突触核蛋白核酸疫苗免疫鱼藤酮慢性帕金森病小鼠的试验研究

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1、重庆医科大学硕士学位论文优化人α--突触核蛋白核酸疫苗免疫鱼藤酮慢性帕金森病小鼠的试验研究姓名：杨旭申请学位级别：硕士专业：神经病学指导教师：彭国光201205重庆医科大学硕士研究生学位论文优化人值．突触核蛋白核酸疫苗免疫鱼藤酮慢性帕金森病小鼠的试验研究‘摘要目的1．探讨优化人核酸疫苗仅一synucleinDNAvaccille(pVAXl．IL4／SYN．B)对鱼藤酮慢性帕金森病小鼠的治疗作用。2．探讨优化人核酸疫苗仅-synucleinDNAvaccille(pVAXl·IL4／SYN—B)预防接种对慢性

2、鱼藤酮损害小鼠的神经保护作用。方法1．在健康小鼠背部皮下进行鱼藤酮(1mg／l(g)注射，1次／d，一共连续注射40d，从而建立慢性鱼藤酮PD小鼠模型。把成功建立PD小鼠模型后的小鼠随机进行分组：核酸疫苗组、空质粒组、PBS对照组。然后在全部模型小鼠的两侧后肢胫前肌的部位，分别注射优化人核酸疫苗pVAXl一IL4／SYN—B，空质粒pVAXl，PBS各100uL，每3周进行注射一次，总共注射3次。在最后一次注射后2周，采用自由活动实验观察小鼠行为学的变化；采用I弭PCR方法检测各组小鼠黑质致密部位的旺．svn

3、mRNA表达情况。运用免疫组化方法检测各组小鼠脑黑质致密部位0【．突触核蛋白(泓synuclein，Q．syn)的表达以及酪氨酸羟化酶(tyrosiIlehydroxylase，TH)阳性神经细胞数目的变化；2．将健康小鼠进行随机分组：核酸疫苗组、空质粒组、PBS对照组，+本课题由重庆市医学科研计划重点项目(2009一卜58)重庆医科大学附属第一医院医学科学基金项目(YXJJ2009—24)重庆市卫生局2011年医学科研计划项目(面上项目)(2011—2～131)资助3重庆医科大学硕士研究生学位论文在全部小鼠

4、两侧后肢的胫前肌分别注射pVAXl．IL4／SYN．B优化人核酸疫苗，空质粒pVAXl，PBS各100ul，总共进行免疫注射3次。在最后一次注射3周后，对全部小鼠进行鱼藤酮慢性暴露，在小鼠的背部采用鱼藤酮1mg／l(g进行皮下注射，1次／d，一共注射40d。然后在最后一次注射完成后，运用自由活动实验观察小鼠行为学变化；运用免疫组化方法对小鼠中脑黑质致密部位的仅．syn表达以及TH阳性神经细胞数目变化进行检测；通过RT-PCR检测小鼠黑质致密部位Q．synmRNA表达变化情况。结果1．通过自由活动实验结果显示，

5、核酸疫苗组与空质粒组及PBS对照组小鼠相比较，其移动格子数以及下肢站立次数均有明显改善(P<0．051。通过免疫组化检测发现核酸疫苗组小鼠与空质粒组、PBS对照组相比，中脑黑质致密部位的TH阳性神经细胞数目增加1r51．43％、59．oo％(P<0．05)，而仅一syn表达减少了45．64％、43．28％，(P

6、．05)。2．自由活动实验检测发现，核酸疫苗组小鼠移动格子数及下肢站立次数较空质粒组、PBS对照组有所明显改善(P

7、对照组(O．73±O．01)相比较有所明显减少(P

8、酮；免疫治疗重庆医科大学硕士研究生学位论文STUDYINoPTIMIZEDHUMANQ—SYNUCLEINDNAVACCINEIMMUNIZERoTENoNEINDUCINGoNCHRONICMOUSEMODELOFPARKINSON’SDISEASEABSTRACTObjiectiVe1．TbstudytheimmuotllerapeuticefI’ectsoftheoptimizedhuman旺