rnai介导的埃兹蛋白下调可抑制异位子宫内膜细胞的迁徙

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1、浙江大学硕士学位论文RNAi介导的埃兹蛋白下调可抑制异位子宫内膜细胞的迁徙姓名：江桥英申请学位级别：硕士专业：妇产科学指导教师：吴瑞瑾20120228浙江大学硕士学位论文l矾Ai介导的埃兹蛋白下调可抑制异位子宫内膜细胞的迁徙浙江大学医学院妇产科学(普通妇科)’硕士研究生江桥英指导教师吴瑞瑾主任医师中文摘要研究背景：，子宫内膜异位症(endometriosis，EMs)是育龄期妇女的常见病和多发病，严重影响着10％．15％的育龄妇女的健康，在不孕症患者中，内异症的发病率高达30％。然而，对于内异症的发病机制，虽然国内外学者进行了广泛的基础和临床研究，也已提出多种假说，

2、如经血逆流种植学说、医源性及血液淋巴播散学说、体腔上皮化生学说、内分泌学说、免疫学说、遗传学说以及环境毒素学说等，但没有一种假说能够解释所有的内异症机理，故其发病机制仍未完全阐明。目前，人们较为广泛接受的是Sampson的种植学说及Meyer的组织化生学说，研究的热点也主要集中在子宫内膜细胞的转移及种植生长的分子及免疫机制。E撕n是埃兹蛋白．跟连蛋白．膜突蛋白(ez血．radixill．moesin，ERM)蛋白家族成员之一，为膜细胞骨架蛋白，主要分布于富含肌动蛋白纤维的细胞质膜下以及微绒毛、丝状伪足、尾足、膜皱折处和细胞接触粘连部位等细胞结构中，也可在分裂细胞的卵

3、裂沟处表达。在肿瘤细胞中，E面n则弥散分布于胞浆和胞膜，提示E面n的亚细胞定位对于肿瘤的发生和侵袭扩散有重要意义。目前国内外各项研究显示，E可iIl的主要功能是通过调节皮质细胞骨架，参与形成细胞表面绒毛等特化结构及其形态的维持、细胞生长的调控、介导细胞信号的转导、调控肿瘤细胞的Il浙江大学硕士学位论文．中文摘要粘附、转移与侵润、参与细胞的吞噬与凋亡等。近年来，E面n在肿瘤细胞的粘附及迁移中的作用日益明确，其与妇科疾病的关系也日益受到学者们的关注。然而，综合国内外各项研究，E面n蛋白在子宫内膜异位症发病机制的研究尚少。‘在本研究中，我们首先利用realtimeRT-P

4、CR技术检测E痂蛋白及其可能的下游信号分子ImoC／RhoA瓜OCKl在卵巢型子宫内膜异位症患者的在位内膜、卵巢异位内膜及非子宫内膜异位症患者的在位子宫内膜的rr心A表达水平，初步分析E殖n在子宫内膜异位症发病机制中可能发挥的作用；然后通过卵巢型子宫内膜异位细胞的原代培养，利用siRNA干扰技术，下调E撕n在异位子宫内膜细胞的表达水平，通过划痕试验验证E撕n在异位子宫内膜细胞迁徙中的作用；最后利用w．eStemBlot技术检测干扰前后其下游蛋白Rhoc／RhmOcKl的表达水平变化，初步验证E面n蛋白在子宫内膜异位症发病机制的信号转导通路。研究日的：检测E面n蛋白及

5、其可能的下游分子I地oC／Imo觚OCKl在子宫内膜患者及非子宫内膜异位症患者中的表达水平，利用相关试验技术初步探讨E面n蛋白在异位子宫内膜细胞迁徙及子宫内膜异位症发病中的作用。材料与方法：选择2010年5月至20lO年12月在浙江大学医学院附属妇产科医院因子宫内膜异位症行手术治疗的IⅡ～Ⅳ期(根据1985年美国生育学会修正的子宫内膜异位症分期标准r-SFS进行分期)卵巢型子宫内膜异位症患者的在位子宫内膜(在位组)及卵巢异位囊肿囊壁(异位组)15例，平均年龄35．8岁，范围23—52岁；其中增生期9例，分泌期6例；同时收集同期非子宫内膜异位症患者的在位子宫内膜(对照

6、组)14例，平均年龄39．2岁，范围25～49岁；其中增生期9例，分泌期5例。利用re甜timeR工qPcR方法检测E捌n瓜ho抛oC瓜0CKl在以上组织的表达水平；然后通过异位子宫内膜细胞的原代培养，利用si鼬蛆干扰技术、细胞划痕技术及wIestemblot技术验证Ez血蛋白在异位子宫内膜细胞迁移及子宫子宫内膜nT浙江声磋硕士学位论文异位症发病机制中的作用。中文摘要结果：1、E耐n蛋白在异位子宫内膜的mRNA表达水平显著高于在位子宫内膜及非子宫内膜异位症患者的表达水平(P

7、94±0．066；2、I池oA在异位子宫内膜的在位子宫内膜及非子宫内膜异位症患者的n心A表达水平分别为0．995±O．292；O．742±0．279；0．673±O．198，其中异位组显著高于在位组和对照组(PO．05)；。5、通过对异位子宫内膜细胞的原代培养及划痕试验发现，当E砒蛋白被siI斟A显著下调后(B撕n的蛋白平均干扰效率为66．35士11