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时间:2019-03-01
《北方某地区牛布鲁菌病流行病学调查及布鲁菌多重pcr检测方法的建立》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、分类号S855.1学校代码10129UDC579学号2009201094北方某地区牛布鲁菌病流行病学调查及布鲁菌多重PCR检测方法的建立BovineBrucellosisSerologicalInvestigationinaRegionofNorthChinaandFormationofMulti-PCRDetectingforBrucellosis申请人:云涛学科门类:农学学科专业:预防兽医学研究方向:动物传染病学导师:希尼尼根副教授论文提交日期:二〇一二年六月摘要为了解北方某地区牛群中布鲁菌病的疫情,采
2、取更为有效的防控措施,本文利用虎红平板凝集试验(RBT)、试管凝集试验(SAT)和间接酶联免疫吸附试验(I-ELISA)随机对该地区牧场及散养牛群进行了布鲁菌病流行病学调查,同时对以上三种方法的检测水平进行了比较;根据GenBank已发表的布鲁菌基因序列计合成三对特异性引物,建立了同时检测布鲁菌属及牛、羊种布鲁菌的诊断鉴别性多重PCR方法,并对其进行了初步应用。用上述三种方法随机对北方某地区牧场和散养牛的950份血清进行布鲁菌病血清抗体检测,表明该地区布鲁菌病流行情况较为严重,但不同群体阳性率差异较大,牧场
3、阳性率最高达50%,最低阳性率仅为4.6%,种牛场未检出阳性血清,散养奶牛阳性率为39.3%;RBT检出阳性血清105份,阳性率为15.8%,SAT检出阳性血清128份,阳性率为19.2%,I-ELISA检出阳性血清262份,阳性率为27.6%,结果表明I-ELISA阳性率最高,SAT次之,RBT最低。所建立多重PCR方法的敏感性可达100pg左右,且具有很好的特异性与重复性,对7株参考株葡萄球菌26001等的PCR扩增均为阴性,初步临床样品应用表明该方法可用于乳样、阴道及粪便棉拭的检测。关键词:布鲁菌病;
4、流行病学调查;多重PCR;应用BovineBrucellosisSerologicalInvestigationinaRegionofNorthChinaandFormationofMulti-PCRDetectingforBrucellosisAbstactTounderstandthesituationofbrucellosisinaregionofnorthChinaandapplythemoreeffectiveprecautions,thisstudyappliedepidemiologicals
5、urveystochasticallyinthegrazingfarmsanddistributivecattlegroupsinthisregion,usingRoseBengalPrecipitationTest(RBT),SerumAgglutinationTest(SAT)andIndirectEnzymeLinkedImmunosorbentAssay(I-ELISA),andcomparedthethreeexperiments,respectively.Basedonthebrucellosi
6、sgenesequencepublishedonGenBank,specializedprimerwassynthesized,multi-PCRidentificationanddiagnosisofBrucellaandbrucellosisoncowsandsheepwereestablishedandprimaryapplicationtestwasalreadyconducted.Stochasticallyusingthethreemethodsabove,950serumsamplesfrom
7、thegrazingfarmsanddistributivecattlegroupsinaregionofnorthChinawereinspected.Resultsshowedthattheepidemicsituationofbrucellosisisrelativelyserious.However,positiveratesgreatlyvaryamonggroupswiththehighest50%andthelowest4.6%inthegrazingfarmsandnobrucellosis
8、werefoundinthebreedingbullfarmsandthepositiverateindistributivecattlegroupswas39.3%;RBTtested105serumsamplesandthepositiverateis15.8%;SATtested128serumsamplesandthepositiveratewas19.2%;I-ELISAtested262serumsa
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