盘基网柄菌（dictyostelium+discoideum）细胞凋亡中细胞色素c的作用分析

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1、2008届硕士研究生学位论文学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是我在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果．据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确说明并表示谢意。作者签名：学位论文授权使用声明日期：塑笾：』：}p本人完全了解华东师范大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文

2、进入学校图书馆被查阅。有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。学位论文作者签名：导师签名：吼盥日期：p·6·fc>2008届硕士研究生学位论文第一章前言1、盘基网柄菌与细胞凋亡细胞凋亡如同细胞生长分化一样，是生命活动中重要的细胞学事件，不同于因受各种伤害导致的细胞坏死，它是一种遵循自身程序结束其生命的主动的细胞学过程，以保证机体能及时清除过多的衰老的或受损的细胞，维持正常的新陈代谢。在某些生理或病理因素的条件下，细胞对内外

3、信号刺激做出应答反应，触发程序性细胞死亡机制。它对于健康机体的维持、神经系统的正常发育、免疫系统正常功能的维持等方面具有重要意义。1．1细胞凋亡的特征形态方面，细胞收缩变圆，胞体变小，胞膜皱缩但完整，常形成泡状突起，胞浆密度升高；细胞的缩小使细胞间距增大，相互脱离；胞核固缩，染色质凝集，呈斑块状或月牙状；进而细胞内陷将细胞自行分割为多个有膜包绕的凋亡小体；最后被巨噬细胞上的受体识别并被吞噬。其溶酶体、线粒体、细胞膜结构完好，维持着内外渗透压梯度的平衡和密封状态，因此没有细胞内容物的外溢现象，因而

4、也不引起组织的炎症反应【11。生化方面，胞浆内Ca2+浓度升高，激活Ca2+依赖性核酸内切酶。这些酶在降解DNA的同时，也常常引起胞浆内蛋白质交联或细胞骨架破坏；染色质DNA被核酸内切酶有控降解为50．300kb或160．200bp的寡核苷酸片断【2】。1．2细胞凋亡的信号传导途径细胞凋亡的信号传导途径极其复杂，但许多细胞凋亡的诱因常通过相同的路径来传导死亡信号，这些路径被称为凋亡信号传导的基本通路。Lockshin通过观察鳞翅目昆虫节间肌肉的正常衰变及变性肌肉的超微结构改变，得出结论：当细胞受

5、到生理性和病理性刺激作用后能触发凋亡起始信号，按一系列精确的反应程序启动自身遗传机制，形成级联放大的信号传导和基因表达；再通过信号传导系统将信号传导至效应器，最终导致生理性死亡【3l。在哺乳动物中主要有两种途径导致了细胞凋亡：受体凋亡途径(胞外途径)和线粒体凋亡途径(胞内途径)【24】o1．2．1受体凋亡途径死亡受体(DeathReceptor)是能够诱导细胞凋亡的TNF超家族的亚型，目前已发现FAS、TNF-R1、TRAMP、TRAIL一1和TRAIL-2五个家族成员。这些受体同属l型膜蛋白，

6、其共同特点是胞外部分富含半胱氨酸残基，胞内部分含有2008届硕士研究生学位论文与死亡信号传导相关的死亡区域(deathdomain)【4l。除TRAMP外，TNF死亡受体家族相应的配基已被确定，其结构也具有相似性，皆属¨型跨膜蛋白：由三个相同的亚单位组成的活性配基与受体结合后促使受体聚合而激活。此外配基也可由金属蛋白酶催化后以可溶性形式存在。受体通过死亡区域直接或间接与细胞内衔接蛋白(adoptorprotein)FADD相偶联。FADD是一种胞浆蛋白，C端含有死亡区，N端是一种新的蛋白基序，是

7、死亡信号传导的必需成分，称死亡效应区(deatheffectdomain，DED)【5J，当FADD与受体结合后，借助于DED与FLICE偶联形成DISC(deathinducingsignaIingompIex)复合物。FLICE即Caspase．8前体，其N端也含有DED，C端含有典型ICE蛋白酶结构域，裂解后导致Caspase．8自我活化，进而激活下游效应Caspase诱导细胞凋亡闸。体外研究表明Caspase．8能够直接裂解Caspase．3，4，7，9，10，通过其他Caspase可间

8、接裂解Caspase．2，6rn。1．3凋亡相关基因的调控基因是生物体活动的总指挥，调控细胞的生长与凋亡。细胞凋亡的主动性和程序性以及细胞凋亡时的形态学和生化变化也是一系列基因的激活、表达、调控的结果。细胞凋亡的相关调控基因包括促进细胞凋亡的基因和抑制细胞凋亡的基因两大类嘲，它们相互牵制，相互影响，共同影响细胞凋亡。1．3．1凋亡促进基因凋亡促进基因包括细胞色素c、野生型P53、ICE、TGFB、Fas、c-myc、Ced一3、Ced．4、Bax等。其中Ced．3、Ced．4是在线虫体内发现的，