tgf-β1与ctgf在骨不连接区表达的实验分析

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1、TGF-β1及CTGF在骨不连接区表达的实验研究中文摘要目的：骨折局部常常因为纤维组织及软骨缺乏足够的骨化而形成骨不连，而转化生长因子β1（TGF-β1）及结缔组织生长因子（CTGF）的协同具有明显促进软骨及骨增殖和分化的特性，从而促进骨愈合。本实验通过观察骨缺损不愈合和愈合过程中TGF-β1及CTGF的局部分布和表达水平差异，研究骨缺损不愈合的分子机理，进一步探讨TGF-β1及CTGF对骨折愈合的影响。方法：1、制作骨折愈合及骨缺损不愈合动物模型。选成年新西兰大白兔30只，雌雄不限，随机分为6组，每组5只，制造一侧桡骨干骨缺损

2、不愈合模型为实验组，制造另一侧骨折愈合模型为对照侧。术后1、2、4、6、8、12周取材。2、X线及组织学观察骨愈合及组织学成骨情况。3、免疫组化检测TGF-β1及CTGF的表达。4、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测以上两因子的基因表达。结果：1、X线及组织学检查显示实验组骨缺损区未形成骨性连接，主要为纤维结缔组织所充填，骨缺损两端有少量的膜内成骨及软骨内成骨存在，大部分肉芽组织及肥大软骨细胞转化为纤维结缔组织，断端硬化，髓腔闭塞。对照组膜内成骨及软骨内成骨均活跃，6周时骨折愈合。2、免疫组化显示实验组和对照组TGF-β1及

3、CTGF表达在2周时均明显增强，但实验组表达量明显低于对照组（P<0.05），4-6周实验组TGF-β1及CTGF在各种细胞中表达均明显减少至微弱表达，而对照组在成骨细胞和周围的骨基质中仍有较强表达，差异有显著性（P<0.05）,8周后两组TGF-β1及CTGF表达均微弱，无显著性差异(P>0.05).3、RT-PCR检测显示：实验组TGF-β1mRNA在1、2、4、6周的相对表达量分别为（0.347±0.013、0.785±0.025、0.378±0.029、0.257±0.030），均明显低于对照组的（0.425±0.020

4、、0.950±0.035、0.764±0.022、0.156±0.012），差异有显著性（P<0.05）。实验组CTGFmRNA表达1、2、4、6、周分别为（0.305±0.015、0.283±0.011、0.204±0.013、0.115±0.008），低于对照组同时段的1、2、4、6周（0.426±0.010、0.405±0.021、0.252±0.018、0.138±0.017），差异有显著性（P<0.05）。8周后两组TGF-β1mRNA及CTGFmRNA表达无明显差异（P>0.05）结论：1、骨缺损由于缺乏足够的膜内成

5、骨及软骨内成骨而形成骨不连，这是骨不连形成的重要原因。2、TGF-β1及CTGF在骨不连过程中表达明显较骨折正常愈合过程表达降低。说明这类因子对骨折愈合有明显的促进作用。3、TGF-β1及CTGF在骨折愈合的不同阶段表达不同，在软骨内成骨期表达最强，说明其对软骨细胞的增殖分化起重要促进作用。4、骨折愈合过程中TGF-β1与CTGF表达量有同步性，说明两因子之间在分子水平存在偶联机制。[关键词]骨折；骨不连；TGF-β1；CTGF；免疫组化；基因表达。AnexperimentalstudyofTGFβ1andCTGFexpress

6、ioninareaofbonedefectnonunionAbstractObjective:Fibroustissueandlackofenoughossificationofcartilageatfracturesiteusuallycausebonenonunion.Transforminggrowthfactorβ1(TGF-β1)andconnectivetissuegrowthfactor(CTGF)haveobvioussynergytopromotetheproliferationanddifferentiati

7、onofcartilageandbone,soastopromotefracturehealing.Theobjectiveofthisstudyistoobservethelocalizationandexpressionoftransforminggrowthfactorβ1andconnectivetissuegrowthfactorincallusduringbonedefectnonunion,investigatethemolecularmechanismsofbonedefectnonunionandfurther

8、explorethecorrelativeinfluencesofTGFβ1andCTGFinbonefracturehealing.Methods:1.Thebonedefectnonunionmodelandthefracturehealingmodelwe