用高效液相色谱测定重组人尿激酶原制剂的蛋白含量

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1、生物技术通讯LETTERSINB10TECHN0L0GYVo1．21No．1Jan．，2010doi：10．3969~．issn．1009-0002．2010．O1．020技术方法用高效液相色谱测定重组人尿激酶原制剂的蛋白含量陶铜静，袁婀娜，杨旭，将琴，李小强，李世崇，高丽华，胡显文，胥照平，张正光1．上海天士力药业有限公司，上海201203；2．军事科学医学院生物工程研究所，北京100071[摘要]目的：用RP-HPLC方法对注射用重组入尿激酶原制剂蛋白含量进行定量分析。方法：用反相Cl8柱、0．1％TFA水溶液与0．1％乙腈进行

2、梯度洗脱，280nm波长紫外检测器监测；以重组人尿激酶原同质标准品作为对照品，根据进样量和相应的峰面积建立标准曲线方程，将待测定样品的峰面积代入标准曲线方程，可测得蛋白含量。结果：按照方法学验证要求对此方法进行了专属性、检测限、定量限、线形、精密度(重复性、中间精密度)、准确度(回收率)考察，线性范围为9-27g，回收率在97％以上，RSD<2．0％，完全满足对制剂蛋白的定量需求。结论：本方法准确，适用于注射用重组人尿激酶原成品制剂蛋白定量测定。[关键词]注射用重组人尿激酶原；蛋白含量；高效液相色谱；方法学验证[中图分类号]Q502

3、[文献标识码]A[文章编号]1009—0002(2010)01—0080—03DeterminationoftheContentofRecombinantHumanPro．．Uroki．naseinInjectionPreparationbyHighPerformanceLiquidChro-matographyTA0Tong-Jing'，YUANE-Nuo，YANGXu，JIANGQin，LIXiao—Qianga，LIShi——Chong~,GA0Li—·Hua：,XUZhao-Pin~,HUXian——Wen2,ZHANGZh

4、eng-Guanf1．ShanghaiTaslyPharmaceuticalLimitedCompany，Shanghai201203；2．BeijingInstituteofBiotcchnology，Beijing100071；China[Abstract]Objective：Themethodofseparationandquantityoftherecombinanthumanpro—urokinasepro—UK)preparationforinjectionthatcontainsvehiclesisnecessary．

5、Methods：Thehighperformanceliquidchromatography(HPLC)wasusedforseparationanddeterminationofthepro—UKpreparationandthereversed—phaseC18columnwasmadetouse．Thepro—UKofthesamplewaselutedbygratietelutionmethodwithO．1％ofTFAofwater0．1％ofacetonitrileusedformobilephase．The280nmU

6、Vdetectorwasusedfordetectionoftheproteinpeakoftheprotein．Thestandardpreparationofrecombinanthumanpro-UKasexternalstandardandthediferentvolumeofthestandardpreparationwasinjectedintoHPLC．Theproteincontentofpro-UKinthesamplewascalculatedbyusingtheareaofpeakoftheprotein．Re

7、sults：Theproteinoftherecombinantpro-UKpreparationwasseparat—edanddeterminedbyHP[C．Theregressionequationwasobtainedaccordingtoinjectedvolumeandpeakareaoftheproteinandtheregressioncoefeciontwasmorethan0．999．Thespecificity，accuracy，sensitivity，andrecovercywasstudied．Thede

8、terminationextentwas9-27g．Theprecisionwaslessthan2．0％．Therecoverywas97％-103％．Thestandarddeviationwaslessthan2．0．Concl