牛伟萍-梅花鹿10.9.28

《牛伟萍-梅花鹿10.9.28》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、梅花鹿微卫星DNA富集文库的构建与鉴定牛伟萍张丽颖杨润军张嘉保赵志辉*张明军收稿日期：2010-09-17基金项目：长春市科技支撑计划项目资助（08KJ36）作者简介：牛伟萍(1987-)，女，硕士研究生，主要从事生物化学与分子生物学方向的研究。*通讯作者：E-mail：mjz1967@163.comEmail：zhzhao@jlu.edu.cn（吉林大学畜牧兽医学院，吉林长春130062）中图分类号：S603.7文献标识码：A摘要：梅花鹿基因组DNA经限制性内切酶MboI酶切，用1.5%的琼脂糖凝胶电泳回收400~1000bp的DNA片段，与MboI连接接头相连接，连接

2、产物与生物素标记的（AC）15微卫星探针变性及退火，再通过链亲和素偶联磁珠亲和捕捉，经吸附，洗涤及洗脱，然后以洗脱产物为模版，以其中一个接头为引物进行PCR扩增，将扩增产物回收纯化并与pMD18-T载体相连接，转化大肠杆菌DH5a，构建梅花鹿(AC)n微卫星DNA富集文库，经测序分析表明该文库含重组克隆约为1380个，其中计算得到阳性克隆率为82.9%。梅花鹿微卫星文库的建立将为一步进行梅花鹿基因组结构的分析、梅花鹿遗传连锁图谱的构建、分子进化和系统发育研究、标记辅助选择以及经济性状的QTL定位提供大量的微卫星标记。关键词：梅花鹿；微卫星；遗传标记Construction

3、andidentificationofDNAlibrariesenrichedformicrosatelliterepeatsequencesinsikadeer（NIUWei-ping,ZHANGLi-ying,YANGRunjun,ZHANGJia-bao,ZHAOZhihui*，ZHANGMing-jun*）（CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine,JilinUniversity,Changchun130062,China）Abstract:GenomicDNAsfromsikadeerwerecleavedwithr

4、estrictionenzymesMboI.Thefragmentsinsizefrom400bpto1000bpwererecoveredby1.5%agarosegelelectrophoresisandligatedwithadaptor,andthendenaturedandhybridizedbiotinylated(AC)noligonucleotide.Thebiotinylatedhybridswereretainedonthemagneticparticlesaccordingtothestrongaffinitybetweenbiotinandstre

5、ptavidin.TheeluatewasamplifiedbyPCRandclonedintopMD18-Tplasmidvector,andthentransformedintoEscherichiaEcoliDH5αtoconstructDNAlibrariesenrichedformicrosatelliterepeatsequencesofsikadeer.Sequenceanalysisshowsthatthelibrarycontains1380clonesand82.9%ofthecloneswithpositive.Microsatellitelibra

6、ryofdeerwillsteptotheanalysisofgenomestructuredeer,sikadeergeneticlinkagemapping,molecularevolutionandphylogeneticstudies,marker-assistedselectionandQTLlocalizationeconomictraitstoprovidealargenumberofmicrosatellitemarkers.KeyWords:sikadeer;microsatellite;geneticmarkers梅花鹿为东亚特有的珍贵动物，历史上我国

7、梅花鹿资源非常丰富，分布范围也极为广泛，但由于自然因素及人为因素的影响，中国梅花鹿6个亚种中仅存3个亚种：四川亚种，华南亚种和东北亚种，其分布范围也大为缩减，种群数量急剧减少，已处于濒危的状态[1-2]。微卫星（Microsatellite）又称简单序列重复（SSR），一般以1~6个碱基为核心序列，首尾相连组成的串联重复序列。这种序列存在于几乎所有真核生物的基因组中，且成随即均匀分布，它们不仅大量分布于基因的间隔区和内含子中，而且还分布于基因的外显子和调控区（如：启动子和增强子等）[3]。真核生物的基因组中以二核苷酸重复如CA