非小细胞肺癌缺氧诱导因子-2α表达与肿瘤脉管生成和上皮—间质转变的关系

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1、分类号VDC博士学位论文密级非小细胞肺癌缺氧诱导因子．2仅表达与肿瘤脉管生成和上皮．间质转变的关系Correlationofhypoxia--induciblefactor-2aexpressionandangiogenesis，lymphangiogenesisandepithelial-mesenchymaltransitioninnon—smallcelllungcancer作者姓名：周晖学科专业：外科学学院(系所)：湘雅医院指导老师：陈胜喜教授副指导老师：刘进康教授论文答辩日期zol五-lI-卅答辩委员会主席型中南大学二O一二年十一月原创性声明本人声明，所呈交的学位

2、论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特J8lDi：i以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：壁墅日期：丝生年上月兰日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信

3、息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：导师签复窒生日期：2一,．oi-年一I1月土日本课题受以下基金资助：国家自然科学基金面上项目(批准号：81172226)湖南省科研条件创新专项计划项目(批准号：2012TT2031)博士学位论文中文摘要摘要背景：肺癌是全球发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。非小细胞肺癌(non．smallcelllungcancer，NSCLC)占肺癌总数约80％，尽管人们根据不同的肺癌分期采用了包括手术切除、化疗、放疗及靶向药物治疗在内的综合治疗方案，但从1975年至U2011年NSCLC的总体五

4、年生存率改善并不明显，只是从13％增加到16％，早期可切除NSCLC的5年生存率也只有60％～70％，最终1／4～1／3的患者仍死于转移和复发。为进一步改善NSCLC患者的治疗效果和预后，迫切需要研究与NSCLC转移和复发密切相关的肿瘤侵袭和转移的分子机制，并根据其信号通路和关键调控因子设计和寻找抗侵袭和转移的新途径。大量研究已经证实缺氧可以促进肿瘤的发生和发展，在这个过程中，缺氧诱导因子(hypoxiainduciblefactor，HIF)家族起着非常重要的作用。HIF．1和HIF．2是缺氧诱导因子家族中最重要的两种参与组织乏氧调控的因子，尽管在基因序列上HIF．10【

5、和m．20【之间具有明显的同源性，但他们在肿瘤的进展中发挥重要的但不重叠的作用。近年来在乳腺癌、肾透明细胞癌、肺癌、神经母细胞瘤的一些研究发现HIF．2a而不是HIF．1a为促进肿瘤进展的主要调节因子，HIF．20c与恶性肿瘤转移以及预后关系密切，HIF．2cx可能是NSCLC患者评估肿瘤恶性风险一个有用的指标和潜在的一个肿瘤防治目标。然而，HIF．20【是通过哪些途径促进NSCLC侵袭和转移以及相关的分子机制仍然不清楚。肿瘤血管生成和淋巴管生成对实体瘤经血管、淋巴管播散具有重要的作用，是发生转移的主要途径，其中VEGF．A、VEGF—C分别是调控血管生成和淋巴管生成的主要

6、因子。上皮．间质转变(epithelial—T博士学位论文中文摘要mesenchvmaltransition，EMT)是近年来包括肺癌在内的恶性肿瘤基础研究的热点，大量研究表明肿瘤细胞发生EMT后侵袭性明显增强，更容易发生转移。NSCLC)]dO瘤组织中HIF．20c是否通过影响肿瘤血管生成和淋巴管生成以及EMT促进肿瘤侵袭和转移至今仍不明确。目的：探讨HIF．2a在非小细胞肺癌进展过程中的作用及其与肿瘤血管生成和淋巴管生成和EMT的关系。方法：1．采用免疫组织化学染色法观察52例手术切除的非小细胞肺癌组织中HIF．2a、HIF．1仅蛋白的表达情况，分析HIF．2a、HIF

7、．1a蛋白与肺癌临床病理因素的关系。2．采用CD31和D2．40分别标记肿瘤微血管和微淋巴管，免疫组织化学染色染色法观察肿瘤微血管密度和微淋巴管密度以及VEGF．A、VEGF．C蛋白的表达情况，分析HIF．2a、HIF．1a蛋白与肿瘤血管生成和淋巴管生成的关系。3．采用免疫组织化学染色法观察EMT相关蛋白的表达情况，分析HIF．2a、HIF．1a蛋白表达与EMT相关蛋白表达的关系。4．构建特异性脏．2asiRNA表达载体，并借助脂质体将其转入人肺癌A549细胞，实验分为空白对照组(未转染的A549细胞)、阴性对照组