hbv感染不同时期mirna表达、hbv基因型、p基因点突变的研究

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1、苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：I当扯日苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书

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3、外周血单个核细胞(PBMC)microRNA(miRNA)的xMAP液态芯片的检测方法，并运用此技术研究HBV感染者不同时期miRNA表达变化及意义，用直接测序法检测HBV基因型及P区耐药突变位点与HBV感染不同时期的相关因素，探讨其在乙肝慢性化演变中的作用及其在诊断、治疗、判断预后中的应用价值。方法第一部分建立基于xMAP液态芯片技术定量检测HBV感染不同时期PBMCmiRNA的方法，并用该法检测急性乙型肝炎(AHB，40例)、慢性乙型肝炎(CHB，53例)、乙肝后肝硬化(LC，44例)、原发性肝癌(HCC，32例)及正常健康对照组(NC

4、，40例)标本PBMC中miR一191、-223、-222、一145、-21、-31、一126、-20a、-372的表达变化，分析其在乙肝慢性化演变中的作用。第二部分采用直接测序法检测第一部分配对血清标本HBV基因型及HBVDNAP基因区耐药位点突变，对HBV感染后疾病转归的可能相关因素包括性别、年龄、HBV基因型、HBVDNA载量水平、HBeAg状态、miRNA表达水平作多因素Logistic回归分析，分析其在乙肝慢性化演变中的作用。结果第一部分成功建立了PBMCmiRNA的xMAP液态芯片定量检测方法，其具有特异性、重复性、准确性高，能

5、快速、高通量地检测临床标本等优点；与NC组相比，乙肝患者miR-222、．191、一145、-21、-31、-372在HBV感染不同时期无统计学差异(P均>O．05)；miR-223、一126、-20a的表达有统计学差异(P<0．05)，通过多重比较分析，miR-126除AHB和NC组(P=1．00)、CHB和LC组(P--O．11)外，其余各组间均有统计学差异(P

6、)，且随HBV感染慢性化演变表达上调；miR-223除NC和AHB组(P=1．00)之外，其余各组间比较均有统计学差异(P

7、进展有关，且与肝癌的发生发展有关。通过直接测序法检测P基因区耐药相关位点发现，在自然状态下HBVDNA也可发生P基因区耐药位点相关基因突变，LAM相关的耐药基因突变率可达11．25％，ADV相关的耐药基因突变率可达4．73％，LdT与LAM存在交叉耐药位点，这些突变株占HBV感染者的10．65％，提示在NA抗病毒药物使用前就可能存在耐药突变株。通过对性别、年龄、HBV基因型、HBVDNA载量水平、HBeAg状态、miRNA表达水平以及P基因区位点突变情况等进行多因素Logistic回归分析，结果表明HBVC基因型、DNA载量持续低水平、mi

8、R一20a表达上调、miR一126和miR一223表达下调可能与乙肝慢性化进展有关，而HBeAg状态、自然状态下发生的耐药相关位点突变，年龄、性别等因素可能与乙肝慢性化演变无关。