斑节对虾几种激素和基因与卵巢发育相关性的研究

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1、学校代码：10264研究生学号：M090101097上海海洋大学硕士学位论文斑节对虾几种激素和基因与卵巢发题目：育相关性的研究Reseachofsomehormonesandgenesbeingcorrelationwithovarydevelopmentfrom英文题目：Penaeusmonodon专业：水产养殖研究方向：海洋生物分子生物学姓名：周俊指导教师：江世贵研究员二O一二年六月上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体

2、已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年上海海洋大学硕士学位论文斑节对虾几种激素和基

3、因与卵巢发育相关性的研究摘要由于目前普遍采用的剪眼柄催熟法存在很多弊端，对斑节对虾繁育机理进行研究以寻找新的安全便利的催熟方法成为突破斑节对虾雌性性腺难以大批量集中成熟问题的研究重点和难点。本研究确定了实验用斑节对虾卵巢发育所处时期，检测了卵巢发育过程中血淋巴的四种激素的浓度变化，同时，克隆了与M期相关的MPP6基因，研究了MPP6基因表达情况及其与卵巢发育调控相关基因cyclinB以及cdc25的表达差异和相关性，为进一步研究与卵巢发育相关的激素和基因间的关联网络奠定基础，为研究斑节对虾卵巢发育调控机理提供参考资料。本实验采用石蜡切片和HE染色技术，结合解剖学、细胞学和组织学技术对斑节对虾

4、卵巢各分期进行分类和鉴定，确定了实验用斑节对虾卵巢发育所处时期。主要鉴定依据为卵母细胞特征，即Ⅰ期卵巢中绝大多数细胞为卵原细胞，细胞小且细胞核比较大。Ⅱ期中大多数卵母细胞是染色质核仁期卵母细胞和周边核仁期卵母细胞。Ⅲ期中已出现少量的卵黄囊卵母细胞。Ⅳ期中大多数卵母细胞是卵黄囊卵母细胞。Ⅴ期中可见成熟的边缘布满皮质杆状体的卵母细胞。Ⅵ期中多数卵母细胞是染色质核仁期卵母细胞和周边核仁期卵母细胞及部分皮质杆状体的卵母细胞。采用化学发光法（Chemiluminesenceimmunoassay,CLIA）检测了卵巢发育阶段（Ⅱ期至Ⅵ期）血淋巴中促黄体生成激素（Luteinizinghormone,L

5、H）、促卵泡生成激素（Follicle-stimulatinghormone,FSH）、孕酮（Progesterone,P）和雌二醇（Estradiol,E2）的浓度和变化趋势。实验结果显示，卵巢发育过程中斑节对虾血淋巴中促黄体生成激素在卵黄积累阶段Ⅱ期至Ⅳ期浓度较高，Ⅱ期约为0.27mIU/ml和Ⅳ期约为0.24mIU/ml。卵巢成熟期Ⅴ期浓度最低约为0.10mIU/ml，而后在恢复期浓度增大。促卵泡生成激素的浓度在卵巢发育起始期Ⅱ期达到峰值（约0.13IU/ml），而后在卵巢发育过程中浓度持续下降，至卵巢成熟期Ⅴ期浓度最低（约为0.03IU/ml），而后在恢复期浓度增加。孕酮浓度在卵巢发

6、育Ⅱ期缓慢升高，至Ⅵ期增长为105.3pg/ml。雌二醇浓度在卵巢发育期中浓度大致相同，最大值Ⅲ期（77.0pg/ml）为最小值Ⅳ期（68.7pg/ml）的1.2倍。斑节对虾血淋巴中E2浓度自Ⅱ期卵巢开始发育起一直维持在较高水平，且呈高低交替变化趋势。结果显示I上海海洋大学硕士学位论文斑节对虾四种激素与卵巢发育有关，与其在脊椎动物中的功能一致可能发挥着促进卵巢发育的作用。采用cDNA末端快速扩增技术（RapidAmplificationofcDNAEnds,RACE）从斑节对虾总RNA反转录产物中获得了碱基长度为690bp的M期磷酸蛋白6（M-phasephosphoprotein6,MPP

7、6）的全长cDNA序列，并命名为PmMPP6。该序列包含68bp的5’非编码区（UTR）和172bp的3’非编码区以及450bp的开放阅读框（ORF），可编码149个氨基酸。预测分子量为17.01kDa，理论等电点为4.89。序列比对分析表明PmMPP6与致倦库蚊（Culexquinquefasciatus）的相似性和同源性最高。位点分析显示PmMPP6无糖基化位点，但是含有六个磷酸化位点，分别为5个Ser位