tipe2和foxp3mrna在原发性肝癌患者pbmcs及肝组织中表达及临床意义初步探讨

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1、中文摘要TIPE2和FOXP3mRNA在原发性肝癌患者PBMCs及肝组织中的表达及临床意义的初步探讨摘要目的TIPE2(Tumornecrosisfactor-alpha-inducedprotein一8like一2，TNFAIP8L2)是由美国宾夕法尼亚大学YouhaiH．chen，教授在实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中首先发现的新基因，其与肿瘤坏死因子诱导蛋白．8(tumornecrosisfactor-a．inducedprotein．8，TNFAIP8)高度同源，负性调节特异性免疫和固有免疫，是体内调节免疫动态平衡的重要基因之一。敲

2、除TIPE2基因的鼠(TIPE2．／-)可表现为多器官的炎症，脾脏肿大和过早的死亡。TIPE2包含一个类似死亡效应结构域(deatheffectdomain，DED)样蛋白区域，可与caspase．8蛋白结合，从而影响n师Q介导的凋亡，在肿瘤的发生中发挥重要作用。先前研究表明TIPE2不仅高表达于免疫细胞和免疫组织，如淋巴结、淋巴细胞和单核细胞等，也表达于其他非免疫细胞，如，腺上皮细胞、分层或假复层上皮细胞及肝细胞、神经元细胞、软骨细胞。而且对人TIPE2特性的研究表明TIPE2可能参与了很多疾病的发生发展，但具体机制尚不清楚。最近Lua

3、n等应用蛋白印迹法(Westernblot)和RT-PCR检测发现，从BALB／C小鼠脾脏分离提取的CD4+CD25+Treg细胞(简称Treg细胞)中可检测到TIPE2表达，并可增强Treg细胞免疫抑制功能，提示TIPE2基因可能与Treg细胞介导的免疫调控有关，具体机制尚不清楚。Treg细胞是一群具有免疫抑制功能的T细胞亚群，在感染、肿瘤和移植中发挥重要作用。据报道，Treg细胞可分泌免疫抑制因子从而直接抑制效应性T细胞功能。在很多肿瘤疾病中，Treg细胞的广泛浸润提示预后差、生存率低。研究发现Treg细胞缺失或功能抑制可有效提高机体

4、肿瘤免疫。人FOXP3基因是转录因子forkhead／winged—helix家族成员之一，已被广泛认可是Treg细胞的特异性标记物，是调控Treg细胞发育、分化及成熟的关键转录因子。FOXP3不仅表达于T细胞系，很多肿瘤细胞也均组成性表达(黑色素瘤、神经胶质瘤等)FOXP3，提示FOXP3赋予肿瘤细胞免疫逃逸机能。鉴于免疫系中文摘要统内TIPE2基因的正常表达可以有效的防止机体过度反应和维持免疫稳态，我们推测TIPE2基因和FOXP3在PLC发病机制中具有某种关系。原发性肝癌(PrimaryLiverCancer,PLC)是世界范围内最

5、常见的恶性肿瘤之一，发病隐匿，进展迅速，预后差，死亡率位居第三，近年来其发病率呈上升趋势，严重危害人类健康，攻克癌症已成为世界性的难题。肿瘤的发生是细胞的恶性增殖与细胞凋亡之间平衡失调的结果，同时机体炎症免疫微环境在肿瘤形成和发展中具有重要调控作用，而机体免疫功能低下及免疫监视功能降低是肿瘤形成和发展的关键。因此，本课题的主要目的是通过检测TIPE2及FOXP3mRNA在PLC患者PBMCs及肝癌组织中的表达情况，一方面了解PLC患者PBMCs及肝癌组织中TIPE2表达情况，另一方面探讨TIPE2和FOXP3在PLC发病机制及进展中的作用

6、，为进一步阐明TIPE2在PLC发生和发展中的调控作用奠定基础。方法l病例收集：参照2009年最新《原发性肝癌规范化诊治专家共识》，选择2010—3／2012．2河北医科大学第三医院中西医结合肝病科40例PLC患者和肝胆外科20例PLC肝移植术患者，共60例，同时排除应用免疫药物治疗的患者。男43例，女17例，年龄54．834-13．58岁，均合并肝硬化，其中HBV感染者30例，HCV感染者8例，酒精性肝病5例，不明原因者17例。同期选择健康对照组30人，男13例，女17例，年龄39．234-11．53岁。40例PLC患者及健康对照者均清

7、晨空腹抽取抗凝静脉血6ml，其中3ml用于分离PBMCs，3ml用于流式技术检测；抽取不抗凝静脉血5ml，分离血清备用。收集20例住院PLC患者肝移植术后新鲜的组织标本，分别留取肝癌组织及距癌组织3-5cm的癌旁组织各20份，高分化8例，中分化7例，低分化5例。取部分肝癌组织应用RT-PCR法检测TIPE2和FOXP3rnRNA的表达，其余置于．80℃备用。2PLC患者PBMCs中TIPE2和FOXP3基因表达的检测：分别收集40例PLC患者及健康对照者新鲜外周肝素抗凝血3ml，Ficoll密度梯度离心法分离PBMCs，应用Trizol一

8、步法提取PBMCs中的总RNA，应用半定量RT-PCR检测，了解TIPE2mRNA和FOXP3mRNA的表达情况，并比较各组的差异。3PLC患者肝组织中TIPE2和FOXP3基因表达的检测：中