cd39+tregs在慢性hbv感染中的作用研究

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1、第三军医大学博士学位论文CD39+Tregs在慢性HBV感染中的作用研究姓名：唐艳申请学位级别：博士专业：免疫学指导教师：吴玉章201205第三军医大学博士学位论文CD39+Tregs在慢性HBV感染中的作用研究母摘要研究背景和目的：乙型肝炎病毒(HBV)属于嗜肝非细胞病变的DNA病毒，能诱导不同严重程度的各种坏死性肝炎。HBV持续感染可导致慢性肝炎，可进一步发展为肝硬化和肝癌。虽然对于HBV感染慢性化的潜在机制研究已经有很多的阐述，但究竟是什么原因导致了慢性HBV患者体内的抗病毒免疫应答低下，目前还不完全清楚。有大量的文献表明调节性T

2、细胞(Treg)在慢性乙型肝炎中抑制机体的抗病毒T细胞反应中扮演了重要角色。但是目前文献关于Treg细胞在HBV感染慢性化的作用机制还存有争议，一些研究认为：与正常对照组和HBV急性感染恢复期相比，HBV病毒携带者在外周血和肝脏中的Treg频率增高，并且与HBVDNA病毒载量呈正相关，认为Treg细胞有利于HBV病毒的持续感染；然而，也有一些研究却没能检测到正常对照和I-IBV病毒携带者在外周血中Treg频率的差异。导致这些研究结果不一致的原因有：1)在HBV感染中对Treg细胞的表型和功能的界定标准不一样。比如，有些研究中只采用CD4

3、+CD25+来界定Treg细胞，有些研究中用CD4+CD25mghFoxp3+来界定Treg细胞；2)要精确将慢乙肝患者进行免疫学分期，HBV慢性感染的不同阶段其机体内的免疫学状态是彻底不同的。与小鼠的Treg细胞不一样，人体内的Treg细胞在表型和功能都是异质、可塑的一群细胞。Treg细胞通过不同的功能分子执行抑制效应，比如IL．10、TGF．13、颗粒酶B、穿孔素、CTLA．4、GITR、Lag．3和CD39／CD73等。Treg细胞可能在不同的疾病或者疾病的不同阶段使用不同的抑制机制发挥作用。2007年有两家实验室分别鉴定了在人和

4、小鼠的Treg细胞表面大量表达CD39分子。CD39分子是一种钙、镁离子依赖的胞外三磷酸核苷双磷酸水解酶，其主要作用将胞外ATP和ADP水解为AMP，AMP又可在胞外5’．核苷酸酶CD73的作用下水解为腺苷，腺苷可与效应T细胞膜上的A2AR结合，从而启动cA]VIP依赖的免疫负调。有文献报道与CD25和CTLAl4相比，CD39分子更适合做Treg的表面标志来筛选Treg细胞。已有的研究提示，CD39+Treg细胞在很多疾病中发挥了重要的作用：1)CD39+Treg细胞的比例增多，抑制了CD8+CTL细胞的活化，形成免疫忽视，比如在头颈

5、癌、HIV感染、。本研究受到国家重大基础研究计划(973项目)(No．2007CB512401和2007CB512805)资助8第三军医大学博士学位论文和淋巴瘤等；2)CD39+Treg细胞的比例减少，灭活ATP危险信号的能力减弱，有利于DC的成熟，并促进DC分泌促炎因子IL．1p，继而促进Thl7的活化，发挥促炎效应，比如在IBD、MS、SLE和移植排斥反应等疾病。虽然CD39+Treg细胞在一些疾病中的重要作用已有研究报道，但是，目前还没有CD39+Treg细胞参与HBV感染慢性化的研究报道。慢性HBV感染的免疫分期分为免疫耐受期、

6、免疫清除期、低复制期和再活跃期，免疫清除期和免疫耐受期的机体免疫学状态是彻底不同的，而CD39+Treg细胞既可以抑制效应T细胞清除病毒，导致免疫耐受，又可以灭活ATP信号，减少促炎因子的分泌，有利于抑制炎症。因此，我们推测：CD39+Treg细胞可能在HBV慢性化的进程中发挥了重要的作用。在我们的研究中，我们首先鉴定了CD39+Treg细胞的表型和功能；接着我们将收集的研究对象分为四组：健康对照组、AsCs(无症状的免疫携带者)、CAH组(慢性活动性肝炎)和ACLF组(慢加急性肝衰竭)，分析了这四组研究对象的外周血和肝内的CD39+T

7、reg的频率和表型特点；最后，用Spearman’s相关性检验方法分析了CD39+Treg的频率和临床指标的相关性。通过以上研究拟为HBV感染慢性化的机制找寻一条新的线索。结果1．CD39分子主要表达在FoxP3mgh的效应性Treg细胞表面在我们的研究中，通过流式检测发现，无论是健康人还是不同分期的I-IBV患者，CD39分子在CD4+T细胞的表达频率个体之间差异很大，从0．5％N20％，且其表达的高低与后续的CD39分子在Treg细胞上的分布相关联。因此，为了对后续CD39分子与HBV感染的研究更为详细，我们根据分析数据后所得到规律

8、，把所有研究对象按CD39分子在CD4+T细胞上的表达高低将其分为CD3910w组(<5％)、CD39int组(5．10％)和CD39high组(>10％)。首先，我们对CD39+Treg细胞的表型和功能进